高合成能力的DNA聚合酶由于与模板的结合能力更强,有利于完成高GC含量PCR。超高热稳定性DNA聚合酶也有利于高GC含量PCR,因为较高的变性温度(如,使用98°C代替95°C)可能会促进双链解离和PCR扩增。 多重PCR 多重PCR可在同一PCR反应管中同时扩增多个不同的片段。多种PCR不仅意味着节省时间、试剂和样品,还能够同时对...
在94°C–95°C 变性 30 个循环对 DNA 聚合酶的酶活性的影响是可以不计的。 在PCR 的第一个循环中,通常增加 5 min 的变性时间,以便长链 DNA 分子充分变性。 对于G + C 含量为 55% 或更低的线性 DNA 模板的常规扩增,建议在 94°C–95°C 下变性 45 秒。对于更高 G+C 含量的模板,推荐使用从古菌...
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时解旋成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性...
Each qRT-PCR reaction was performed in triplicate as follows: step 1: denaturation at 95°C for 10 min; step 2: 40 cycles of 95°C for 15 s and 60°C for 1 min. PCRs were a relative estimation in triplicate as per the following temperature profile: denaturation 95 °C for 10 min ...
基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至40 ～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法, 除变性温度外、退火...
1.5 反应程序 50°C孵育2分钟,95°C预变性5分钟;95°C变性15秒,60°C退火延伸1分钟,45个循环,在每一循环的60°C时收集FAM荧光信号。 2 判定 2.1 阳性对照Ct值应<30且出现特异性扩增曲线,阴性对照应无Ct值或Ct值≥40且无特异性扩增曲线,试验结果有效;否则应重新进行试验。
PCR cycling was performed at 95 °C, 2 min, followed by 40 cycles of 95 °C, 5 s; 60 °C, 30 s on a RotorGene-6000 (Qiagen), with the fluorescence acquired at the end of each cycle and the gain set to 7 in the green channel. A melt curve performed at the end of the ...
主要的技术步骤是：（1）DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。（2）引物与靶DNA退火 适当降低温度，使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后，又可作为模板与引物杂交，...
Real-time PCR amplification was carried out with the following program: 95°C for 10 min followed by 45 cycles of 95°C for 15 s and 60°C for 1 min. The fluorescence was monitored during each PCR cycle at the annealing and extension step (60°C). Specificity test To ...
在室温下酶活性被完全封闭,经95°C加热后活性才被释放。Hieff®HotStart DNA Polymerase的激活时间只需要2-3 min,兼容现有的PCR程序。本产品防止了在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增,可以有效地进行基因分型实验。 产品用途 本产品主要应用于小鼠基因型鉴定。