【解析】聚合酶链式反应(PCR)技术是在人为条件下进行的DNA分子复制技术,而DNA复制为半保留方式,经过2次循环即复制2次,则合成22个DNA拷贝,故最终可得到1×22=4个DNA分子拷贝,共8条单链,而含有引物Ⅰ的DNA单链有3条,含有引物Ⅱ的DNA单链也有3条单链,不含引物的单链只有2条单链,因此含引物Ⅰ的DNA单链占DNA...
把其中一份放入70℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。 时间到了之后,取出两份样本进行电泳。电泳完成后,比较两者的电泳条带。如果两者的条带一致或者无明显差别(当然,它们的条带也要符合方法2中的条件),则说明RNA溶液中没有残留的RNA酶污染,RNA的质量很好。相反的,如果70℃保温的样本...
【题目】PCR的反应过程1.PCR一般要经历次循环,每次循环可以分为和三步。2.在循环之前,常要进行一次预变性,以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率。3.变性:在90C以上时,DNA解旋。复性:在50C左右时,与结合。延伸:在72C左右时,合成新的4.从第二轮循环开始,上一次循环的产物也作为参与反应,并且由延伸而成的DNA单...
不需要，PCR中引物都是过量加的，而且定量PCR是看Ct值的，所以在一定范围内不影响定量的结果
问题的提出:如何理解PCR反应三次循环得到目的基因?例如,下图中PCR至少第3次才能获得产物AB?至少第3次才能获得产物CD? PCR主要由高温变性,低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成。可以通过下图帮助理解: 第一个循环:扩增出来的新片段很长很长。 第二个...
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不需要，一般体系里面引物都是过量的，b-action的含量相对恒定的，你相对定量看的事ΔΔCt值
靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时，...
热启动 PCR,是提高 PCR 特异性和可信度的最好的方法之一。通过阻止温度升高到变性温度前的 PCR 反应的发生而阻止引物与基因组 DNA 上潜在的高同源性区域结合引起的错误引发(mispriming)。同时热启动还使引物通过互补区域碱基配对而扩增产生的引物二聚体量大大降低。 热启动 PCR 可通过三种方式实现:1) 手动热启动...
PCR延伸终止不需要终止子，常规的反应分变性（94℃），退火（依引物而定）和延伸（72℃）三步。延伸时间依据所要扩增的片段的长度而定，常规的taq酶每分钟延伸1000个左右的碱基。延伸时间结束后，温度升高，DNA解链，延伸就终止了。