解析 一般情况下,循环30次产生的基因片段就够用了,在进行下去酶的活性可能也不会太好 结果一 题目 为什么PCR扩增循环数30次为宜? 答案 一般情况下,循环30次产生的基因片段就够用了,在进行下去酶的活性可能也不会太好 相关推荐 1 为什么PCR扩增循环数30次为宜?
在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增,达到较高水平。因此,应适当调节循环次数,在平台期前结束反应, 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中...
这就开始了变性-退火-延伸的第二个循环。在这第二个循环结束时,有8个单链DNA分子。通过重复30次循环,开始时存在的双链DNA分子被转化为超过1.3亿个新的双链分子,每个分子都是由两个引物的退火点划定起始分子区域的副本。 为了确定扩增是否成功,PCR产物可以通过凝胶电泳进行可视化,显示扩增子的存在/不存在、大小和...
对低浓度模板的扩增,延伸时间要稍长些。 循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多。 PCR反应特点 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合...
PCR引物是含有15-30个碱基的合成DNA寡核苷酸。能够与模板DNA中目标区域的侧翼序列结合(通过序列互补)。在PCR反应期间,DNA聚合酶从 3′端开始延伸引物。因此,引物结合位点必须是靶标附近所特有的,并且与起始DNA的其它部分序列具有最小的同源性,以确保目的片段的特异性扩增。 除了序列同源性,引物还必须考虑到其它相关问...
反应初期,目的DNA片段呈指数形式(2n)增加,随着目的DNA片段的积累,在引物—模板与DNA聚合酶达到一定比例时,酶的催化反应趋于饱和,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期—平台期,这种效应称平台效应。(25-30个循环) PCR的基本原理 PCR过程 PCR反应条件 PCR的特点 标准的PCR反应体系 10×扩增缓冲...
PCR的循环次数决定了扩增程度。一般来说,我们将循环次数设置在25～40次之间。循环次数一方面取决于模板DNA的浓度,另一方面也由扩增的目的所决定。当我们需要扩增片段用于构建克隆时,为了保证片段的保真性,我们可以将循环数设置为30个左右;当我们仅仅是为...
PCR反应通常在经过30-40个循环后终止。最后一个延伸步骤完成后,反应体系保持在延伸温度一段时间,以确保最终扩增出足够的DNA量。此时,PCR反应终止,产物可以被用于其他分子生物学实验。 综上所述,PCR的基本反应过程包括反应体系的制备、加热变性、引物的结合和延伸,以及循环反复,最终在一定的循环次数后反应终止。PCR技术...
7、一致或者非特异性扩增带原因: 1.引物特异性差 2.模板或引物浓度过高 3.酶量过多 4.Mg2+浓度偏高 5.退火温度偏低 6.循环次数过多 对策: 1.重新设计引物或者使用巢式PCR 2.适当降低模板或引物浓度 3.适当减少酶量 4.降低镁离子浓度 5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法 6.减少循环次数 问题3:拖尾 ...
•PCR条件的优化:根据实验需要和待扩增片段的特性,调整PCR反应的温度梯度和扩增循环次数,以获得最佳的PCR产物。 总结 PCR反应体系的正确设置是保证PCR反应成功的关键。通过合理选择和准备PCR反应组分,并且注意优化PCR反应条件,可以获得准确、稳定的PCR扩增产物,为进一步的分子生物学实验和研究提供可靠的基础。©...