pcr变性,退火,延伸温度和时间如下 退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃,可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。对于2...
解析 答:变性温度依据所使用的酶的种类决定,时间采用可以使模板DNA序列完全变性的时间,快速高温处理,有利于保持DNA聚合酶活性;复性/退火的温度和时间选取参考引物的Tm值,若引物较长则退火温度,时间适当提高;延伸温度依据耐热性DNA聚合酶的最高活性温度,延伸时间可根据待扩增片段的长度和DNA聚合酶的扩增效率而定。
PCR 中延伸描述错误的是A.延伸的时间长短与变性、退火无关B.延伸的时间取决于扩增长度和酶活C.延伸温度取决于PCR仪的默认设置D.常见Taq酶的延伸速度在每分钟1-2
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够的。3～4kb的靶序列需3～4min;扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增,延...