将PCR产物与DNA分子量标记物一起进行凝胶电泳,通过比较条带迁移距离与标准标记物的对应关系,确定产物大小。 1. **原理**:凝胶电泳基于DNA片段大小分离,小片段迁移快,大片段慢。电泳后,通过染料(如EB)显影条带。2. **步骤**: - 制备琼脂糖凝胶(浓度根据预计产物大小选择)。 - 将PCR产物与加样缓冲液混合,点...
则pcr产物的大小的估计值为22 + 17 + 500 = 539个碱基。
荧光定量pcr大片段会产生强烈干扰，定量PCR扩增片段小于250bp，不能超过400。荧光定量PCR产物长度最好不要超过300bp，产物越长一次循环激发的荧光就越多，达到荧光阈值需要的循环数就越少，会使得CT值出现过晚，一般采用80-150bp的产物长度，荧光定量pcr大片段会产生强烈干扰，定量PCR扩增片段小于250bp。
如果你的模板序列已知的话，直接将引物序列和模板进行匹配，两条引物之间的DNA片段长度即为目的PCR产物的大小；如果你是想知道PCR仪反应后的产物大小，可以跑琼脂糖凝聚电泳，照胶仪下根据Marker的指示条带读取产物的大小，或者可以用照胶仪自带的软件直接读出所有pcr产物条带的大小 ...
当进行PCR扩增时，你可能观察到扩增产物的大小比起始DNA片段小。这是由于以下几个原因：1、引物的特异性...
在做qPCR的时候,40个循环之后,都会插入一步(6):绘制溶解曲线。 上图的三种颜色代表了我三种不同的PCR产物片段(3个基因) 从左至右依次(产物名称,产物大小,GC含量,GC碱基对): A(蓝色),141bp,59%,84 B(红色),138bp,61%,85 C(绿色),169bp,58%,99 ...
如何知PCR产物大小 最好的办法是找到你的基因序列,然后用生物软件来判断你所找到的引物的退火温度 gc含量等参数 当然还可以看一下你找到的引物能否真的与你的基因配对,因为有的文献上的引物是错的!当然,片段大小更是可以直接读出
在你的已知基因序列上是可以找到引物上的全部序列和一部分序列的。比如说前引物对应已知基因的21-40bp，后引物对应于已知基因的821-840bp,那么你的PCR产物大小就是820bp(840-21+1).]
一般的PCR体系用来扩增800bp以内的片段效果还可以，上了1000bp，我们都推荐使用LATaq酶，或者其他长片段酶，并延长退火时间，保证长片段可以完整复制。请你查查你的序列，看看750bp处是否有容易与引物错配的序列，如果没有，延长退火时间、降低退火温度试试；如果有，降低退火温度或者从新设计引物吧。