13. 5× NP40 裂解液、IP洗涤缓冲液、高盐洗涤缓冲液等在实验前直接加入0.5 mM DTT和无EDTA的蛋白酶抑制剂cocktail (Roche) 后使用。 步骤 1. 细胞培养和体外交联 1. 在培养皿中培养增殖细胞(15cm 培养板),培养至饱和度为80%。 2. 直接加入4-硫尿核苷至终浓度100μM至细胞培养液中。
CoupleClip-TranscriptomeWidemethodtoidentifythebindingsitesofRNAbindingproteins. 试剂准备 1.4-硫尿核苷储存液(1m):4-硫尿核苷260.27mg,1ml?DMSO 2.多西环素储存液(10mg/ml)10mgml1多西环素,DMSO 3.5×NP40裂解液:制备无dtt和蛋白酶抑制剂的5×的储存液,50mm?HEPES.(pH7.5),150mMKCl,2mm?1mMEDTA,Naf,0.5...
让做PAR-CLIP来证明。我看了PAR-CLIP的protocol，感觉和cross-linked RIP很接近啊，不同的是PAR-CLIP...
实验方法PAR-CliP--amethodtoidentifytranscriptome-widethebindingsitesofRNAbindingproteins.试剂准备1.4-硫尿核苷储存液(1M):260.27mg4-硫尿核苷,1ml?DMSO2.多西环素储存液(10mg/ml):10mg弟签迁遁闲衫蟹贯嗜摔邱漓掳停煞围筛商钥蚕顺礁哉秉思檀桐郴戈壬江滓椭酥情慰敬九陌遇撮剂脑皆堵弓疼队戈睦椅盔钠...
PAR-CLIP(photoactivatable-Tibonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation,光活化增强的交联免疫沉淀)是一种新的高通量检测与特定蛋白相互作用的RNA的位点实验技术。PAR-CLIP利用一类具有光活性的核糖核苷类似物(如4-硫尿核苷,4-SU)在细胞培养过程中掺入到新转录的RNA中,活细胞在紫外光(365nm)照射时,RNA...
CLIP (UV-crosslinking and immunoprecipitation)是研究蛋白质和RNA 相互作用的重要技术,它利用了蛋白质和RNA 在256 nm 紫外光照射下会发生共价交联的特性。但是CLIP 是较难掌握的一种技术。由于紫外交联的效率很低(1%~5%),交联的RNA 含量很少,RNA容易降解,RNA 连接效率低,实验流程复杂(~100步) 等因素都增加了应...
环状RNA研究之PAR-CLIP CLIP (UV-crosslinking and immunoprecipitation)是研究蛋白质和RNA 相互作用的重要技术,它利用了蛋白质和RNA 在256 nm 紫外光照射下会发生共价交联的特性。但是CLIP 是较难掌握的一种技术。由于紫外交联的效率很低(1%~5%),交联的RNA 含量很少,RNA容易降解,RNA 连接效率低,实验流程复杂(~...
实验结果图 WB result of PAR1 Rabbit mAb Primary antibody: PAR1 Rabbit mAb at 1/1000 dilution Lane 1: HepG2 whole cell lysate 20 µg Secondary antibody: #JP20040 at 1/10000 dilution Predicted MW: 70kDa Observed MW: 75kDa Exposure time: 90s ...
grid_im = grid.detach().cpu().permute (1, 2, 0).clip (0, 1) * 255 grid_im = Image.fromarray(np.array (grid_im).astype (np.uint8)) return grid_im def make_grid(images, size=64): """Given a list of PIL images, stack them together into a line for easy viewing""" ...
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