Western blot中PAGE染色的实验优化 自1959 年Raymond 和Weintraub 首次使用聚丙烯酰胺作为电泳的支持介质,特别是20 世纪60 年代初Hjerten、Ornstein 和Davis 发表不连续电泳系统的基础工作以来,聚丙烯酰胺凝胶已成为目前生化实验最常用的支持介质,通过使用强阴离子SDS 建立的SDS- PAGE 技术已成为蛋白质分离、分析的常用方法...
6.3 Western blot 样品蛋白质的分离是任何西方印迹实验必不可少的第一步,而PAGE是实现这一目的的典型技术。虽然PAGE凝胶被印在膜上用于印迹本身,但重复的PAGE凝胶也可以用Coomassie亮蓝染色,以作为解释Western印迹结果时的加载对照。 这些可以用来诊断传染病和非传染病...
1、Western Blot 技术专辑之 PAGE胶电泳和转膜PAGE 倒胶的仪器我们在前面 WesternBlot 仪器之选已经介绍过了, 除了顺手的工具 能防止漏胶, PAGE配胶的试剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响,这个配 胶的比例,在分子克隆上有详细的论述,相信大家都不难查到。容易忽视的问题主要在 于过硫酸铵( AP)...
不像组织切片HE染色, 免疫组化和免疫荧光那样可重复(见本人另一文章石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、免疫组化、免疫荧光染色),Western blot常常被我们叫做"玄学",因为这门技术让人琢磨不透,很难做到结果可重复,明明上了相同体积的同个样品,可常常出现复孔的条带趋势不一致。然而,经过笔者硕士期间反复用心琢磨,...
可是由于考马斯亮蓝染色或者银染经过固定不可逆结合,会干扰后面的Western Blot实验,很多人会选择省略掉这一步——同样的样品跑2块胶,一块染色一块转膜,一般也可以说明问题。如果想在转膜前看看电泳结果,你需要用SYPRO Tangerine——这种金色荧光蛋白染料灵敏度很高——检测4ng-8ng蛋白,接近银染,但使用非常简单,最...
前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。
1、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot 检测技术,SDS-PAGE凝胶电泳,实验原理 实验步骤 注意事项 电印迹 SDS-PAGE的优点 SDS-PAGE的缺点 实验常见问题及处理 小技巧,实验原理,背景 基本原理 分类 分离范围 实验中各成分作用,背景,1967年由Shapiro建立。 1969年由Weber和Osborn进一步完善。 他们发现样品介质和丙烯酰胺凝胶...
SDS-PAGEWesternBlot SDS-PAGEandWesternBlot •试剂准备•样品准备•含量测定 •SDS-PAGE •转膜•免疫反应•化学发光•凝胶图像分析 SDS-PAGE •十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE，polyacrylamidegelelectrophoresis）•聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺（N,N...
SDS-PAGE及Western Blot简明操作指南 一.蛋白样品制备 推荐使用RIPA裂解液。一般使用强裂解液,对于coIP可用弱裂解液。 1.准备工作: 1)取足量裂解液,加入PMSF和(或)蛋白酶抑制剂;若要检测蛋白磷酸化,推荐加 入磷酸酶抑制剂。置于冰上预冷。 2)准备足量PBS,置于冰上预冷。 3)提前打开离心机预冷至4度。 2....
免疫荧光、SDS-PAGE、Western-blot实验技术 免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在...