反转录过程中，oligo dT引物与mRNA的3'端poly(A)尾巴具有特异性结合能力。这一特性确保了仅mRNA分子能够被成功反转录，而其他类型的RNA则不会参与其中。在RNA提取过程中，poly(A)尾巴的存在使得oligo dT引物能够与mRNA特异性结合，从而实现对mRNA的选择性扩增。这一机制确保了反转录产物的专一性，避免了...
反转录是一种将RNA转录成DNA的过程,是病毒的基因组复制的关键步骤之一,也是转录组学研究中RNA测序的重要方法。 在反转录中,oligodt能够结合到mRNA的3'端poly(A)尾巴上,作为引物(primer)启动反转录反应。反转录酶会以oligodt为模板,合成一条反向互补的cDNA链。这个cDNA链可以被用作不同的研究方法,比如PCR扩增、...
一般在反转录的时候除了引用特异性引物和oligodT作为反转录得到第一条cDNA链外,运用随机引物的效果也很好,随机引物一般有6-10碱基的寡核苷酸引物,引物的序列是随机的,也就是说随机引物是各种引物的混合物,随机序列的肯能性很多,由于随机引物可能在一条mRNA 链上有多个结合位点而从多个位点同时发生反转录,比较容易合成...
传统mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是根据绝大多数真核细胞mRNA3'端具有的多聚腺苷酸尾(polyA)结构,因此可用含oligo(dT)的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNA。该方法的创始人Liang P和Pardee A根据Poly A序列起点前2个碱基除AA外只有12种可能性的特征,设计合成了12种下游引物,称3′-锚定引物,其通式为5...
oligo dT适合真核生物的mRNA的反转录，而这个 rRNA不同于mRNA，没有polyA尾巴，因此用oligo dT是不能反转录出rRNA的。反转录过程由反转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA（cDNA）。反转录酶存在于一些RNA病毒中，可能与病毒...
2楼说得有道理，确实oligodT反转并不指针对mRNA尾巴上的polyA，来自模板的RNA内部polyA一样可以起始 不过...
至于Gsp,只是在扩增已知gene/gene family以及部分原理的RACE中使用. 用随机引物时要去除总RNA中的tRNA rRNA,只保留mRNA 如果接下来你的PCR产物是外显子,就用oligo dT; 如果是内含子或者包括部分内含子,就用random mRNA反转录之后的cDNA为模板进行PCR,不都是外显子吗?内含子在这之前都被剪切掉了。所以不知道“...
其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。 1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。 2. *长可合成 13 Kb 的 cDNA。 3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。 4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA...
操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开;再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和...