本申请涉及一种固相富集O‑GlcNAc糖肽的制备方法,其包括以下步骤:S1、提供多肽混合物和固相材料,多肽混合物包括无聚糖多肽、N‑聚糖多肽、粘蛋白型O‑糖肽和O‑GlcNAc糖肽;S21、氧化多肽混合物并通过共价结合到固相材料上,去除N‑聚糖后得到固相结合的O‑糖肽和O‑GlcNAc糖肽;或者,S22、去除多肽混合物的N...
本发明公开了一种基于可逆化学酶促标记‑亲水作用色谱富集的O‑GlcNAc糖肽富集方法。具体涉及:基于Endo‑M等糖苷内切酶的突变体的转糖活性进行O‑GlcNAc糖肽的化学酶促标记,将带有噁唑啉结构的N‑糖链整体转接到O‑GlcNAc糖基上,然后利用亲水作用色谱对标记的O‑GlcNAc糖肽进行一步富集。针对富集获得的引入N...
本发明属于蛋白质组学研究方向糖基化蛋白质翻译后修饰研究领域,具体涉及o-glcnac糖链的新型化学酶促标记、富集和化学酶切等,实现了o-glcnac糖肽的无质量标签的高效富集和高灵敏度检测。 背景技术: 1、蛋白质o-glcnac修饰是一种普遍存在于真核细胞中的重要翻译后修饰,调节基因表达、信号转导、免疫应答、能量代谢等...
在第二章中,我们利用GO-WGA成功富集标准0-GlcNAc糖蛋白:牛晶体蛋白(a-Crystallin),利用多组分嵌段亲水聚合物修饰的HILIC填料建立了0-GlcNAc修饰糖肽的富集新方法,成功在HeLa细胞系中鉴定到1145个0-GlcNAc蛋白,1770个0-GlcNAc肽段,2612个0-GlcNAc修饰位点,将现有鉴定规模提高1倍以上;在第三章中,我们有效提取了RNA...
这些蛋白大部分是新的O-GlcNAc修饰蛋白,且不结合麦胚凝集素(Wheat germ agglutinin,WGA).第三部分:O-GlcNAc修饰蛋白定量鉴定新方法的建立:除O-GlcNAc修饰肽段富集外,本论文还以CpOGA~(D298N)对O-GlcNAc修饰蛋白的结合能力为基础,结合邻位连接检测(Proximity ligation assay,PLA)技术构建了确定O-GlcNAc修饰蛋白的...
基于功能化材料的磷酸化与糖基化蛋白质高效富集及鉴定新方法周研究 150 p. 基于生物质谱的蛋白质组学新方法研究磷酸化和糖基化修饰蛋白质 154 p. 基于生物质谱的蛋白质组学新方法研究磷酸化和糖基化修饰蛋白质 1 p. 基于环境响应智能材料的蛋白质N-糖基化富集鉴定新方法研究 发表...
29.与现有技术相比,本发明的有益效果在于:本技术的固相富集o-糖肽的制备方法首先提取蛋白质,然后用蛋白酶水解得到多肽,接着将纯化多肽共价或亲和富集到固相上,在固相上用n-糖苷酶将n-糖肽上的多肽去除,固相保留的即为o-糖肽和o-glcnac糖肽,且所富集的o-glcnac糖肽和位点特异性均处于较高水平。30.同时,再通过o...
GlcNAc糖基化是一种发生在蛋白质丝氨酸或苏氨酸上的翻译后修饰,广泛分布在细胞核与细胞质中,是一种重要的胞内修饰调控方式.O-GlcNAc修饰具有表达丰度低,高度动态化,容易分解等特点,往往需要先对糖蛋白/糖肽进行分离富集,方能有效鉴定.近期针对O-GlcNAc发展了多种衍生及富集方法,结合新型质谱技术,已经在O-GlcNAc糖...
图1. 传统化学酶促标记法对比本文基于可逆化学酶促标记的O-GlcNAc糖肽亲水富集法 近期,中科院大连化学物理研究所叶明亮研究员、秦洪强研究员团队与中科院上海药物研究所黄蔚研究员团队合作,报道了一种高效、通用的O-GlcNAc糖肽富集鉴定新方法,其主要包括三部分:1)利用糖苷内切酶的突变体Endo-M N175Q将O-GlcNAc基团上...
蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰的规模化富集鉴定方法研究 0-GlcNAc糖基化修饰是普遍存在于细胞核蛋白和质蛋白中的一种翻译后修饰,它通常是由单糖以0-糖苷键的形式与蛋白质上的丝氨酸或苏氨酸的羟基相连,是一种重要的胞内修饰... 时照梅 - 《安徽医科大学》 被引量: 1发表: 2015年 一种快速检测O-GlcNAc修饰的生...