2 NLRP3在 dTGN上 聚集形成聚合物 免疫荧光结果表明,在正常条件下,NLRP3-GFP在胞质中散在分布,但经刺激物处理后形成多个小斑点,这些斑点与ASC 存在时形成的单个大斑点不同,这表明NLRP3首先聚集成多个小斑点,然后与ASC合并成一个大斑点。NLRP3的富集表 明,这些斑点在粗细胞提取物中比NLRP3具有更高的比活性,表...
作者现在报道,触发钾流入的经典NLRP3炎性体激活剂,包括ATP、尼日利亚霉素和二氧化硅颗粒,也驱动HK从线粒体解离到细胞质中(图1A)。 为了直接可视化这种释放,作者在 BMDM 中表达绿色荧光蛋白 (GFP) 标记的 HK2,并通过活细胞荧光成像观察 ATP 触发的蛋白质从线粒体的释放(图 1B)。 在用 ATP 处理 15 分钟内,细...
为确定NLRP3是在Parkin缺失时驱动DA神经元Casp1激活的主要炎性小体传感器。将AAV NLRP3-shRNA(或非靶向AAV对照shRNA)和AAV GFP-Cre一起引入Parkinflx/flx小鼠,以防止Parkin缺失后NLRP3激活。免疫印迹分析(图5A)和FLICA染色实验,发现在体内敲...
此外,研究人员还探究了N蛋白对NLRP3炎症小体复合物组装的影响。将HEK293T细胞或A549细胞共转染不同质粒,GFP同时分布于细胞核和细胞质中,NLRP3弥散状分布于细胞质(Fig.7a&7b(a-e));N蛋白和NLRP3表达时,NLRP3与N蛋白共定位,呈斑点状(Fig.7a&7b(f-j));GFP和ASC表达时,GFP与ASC同时分布于细胞核和细胞质中...
作者利用表达 GFP 标记的 NLRP3 的永生化 BMDM (iBMDM) 细胞,并通过 siRNA 敲低 ASC。 用 LPS 加尼日利亚霉素处理后,在约 20% 的细胞中发现了寡聚化的 NLRP3 斑点,但这些斑点在 March5 耗尽的 iBMDM 中显着减少(图 6A)。在SDD-AGE(半变性洗涤剂琼脂糖凝胶电泳)中,NLRP3的高分子量寡聚物在两个不同...
利用rAAV9-CAG-GFP-miR-9转染AFB1处理的小鼠肾小球(图5F和5G),过表达miR-9导致小鼠肾小球中CXCR4蛋白水平降低,nephrin和podocin增加,抑制AFB1造成的TXNIP、NLRP3、ASC和Cleaved-casp1蛋白水平的变化(图5H和5I)。同时减轻了AFB1诱导...
首先,研究者们将AAV GFP-Cre立体定向注射到成年parkinflx/flx小鼠的SNpc区(图1A),引起线粒体功能和质量下降,进而引起DA神经元死亡。通过免疫蛋白印迹分析发现,AAV GFP-Cre组小鼠脑内NLRP3和Casp1上调(图1B),这提示NLRP3炎症小体被激活。研究者们进一步通过免疫荧光染色的结果发现FLICA(标记ASC蛋白)和TH共标,这...
When autophagosomes are formed, there is progressive degradation of GFP and a simultaneous increase in RFP signal. The ratio of RFP to GFP in cells is used to assess autophagic flux. Cells were differentiated into macrophages and then treated with LPS and ATP. Then, cells were imaged by ...
免疫荧光结果表明,在正常条件下,NLRP3-GFP在胞质中散在分布,但经刺激物处理后形成多个小斑点,这些斑点与ASC存在时形成的单个大斑点不同,这表明NLRP3首先聚集成多个小斑点,然后与ASC合并成一个大斑点。NLRP3的富集表明,这些斑点在粗细胞提取物中比NLRP3具有更高的比活性,表明这些斑点是NLRP3的活性形式,并且NLRP3小...
通过体外实验，我们确定了NLRP3活性所在的亚细胞部分。HEK-293T细胞的提取物采⽤差速离⼼法分离将NLRP3-GFP细分为P5(重膜)， P100(轻膜)和S100(胞质)三种组分，⽤NLRP3活性测定法测定其含量。虽然NLRP3蛋⽩主要存在于S100(胞质)中，然⽽NLRP3活性仅在P100(轻膜)和P5(重膜)中被检测到(图1)，表明...