确定洗脱液中蛋白浓度。洗脱的蛋白可用于SDS-PAGE分析。 Note:4 可用 凝胶过滤 的方法(C500090重力型去盐柱) 或透析去除咪唑。如进行SDS-PAGE,样品中含6 M 盐酸胍 时必须透析 到8 M尿素中。4 如想得到更好的纯化效果,请适当延长孵育时间。4 如果购买的是C600792中压色谱柱, 请根据实际使用仪器的要求进行柱...
SDS流程: 1、BCA法测量样品蛋白浓度 2、根据测定样品的蛋白浓度,算出5~10μg/孔所需的体积。 3、向1.5mlE管中加入含5~10μg蛋白的样品溶液,若体积小于10μl,则加20mMPBSpH7.4 补足10μl;若体积大于10μl,则要加入1ml无水乙醇,-20℃下浓缩1h。
7. SDS-PAGE检测: 1) 不同浓度SDS-PAGE分离胶分离范围-2-分离胶浓度 6% 8% 10% 12% 15%分离范围 50～150kD 30～90kD 20～80kD 12～60kD 10～40kD2) SDS-PAGE操作流程 A. 每个胶孔最适蛋白上样量为5~10μg。 B. 将含5~10μg蛋白的样品溶液与loading buffer混 ...
图4.SDS-PAGE图 1:包涵体,2:流穿液,3:50mM咪唑洗脱液,4:400mM咪唑洗脱液。 (3)不同金属离子及洗脱条件对纯化效果的影响 使用Ni-NTA Agarose,His标签重组蛋白的上样量为10ml,用含有20、50、100、200、500mM 咪唑的缓冲液3洗脱,缓冲液1和2均加入终浓度为1%的吐温80,其结果表明加入表面活性剂可以降低杂吸...
SDS-PAGE流程: 1、BCA法测量样品蛋白浓度 2、根据测定样品的蛋白浓度,算出5~10μg/孔所需的体积。 3、向1.5ml EP管中加入含5~10μg蛋白的样品溶液,若体积小于10μl,则加20mM PBS pH7.4补足10μl;若体积大于10μl,则要加入1ml无水乙醇,-20℃下浓缩1h。
4可用凝胶过滤的方法(C500090重力型去盐柱)或透析去除咪唑。如进行SDS-PAGE,样品中含6 M盐酸胍时必须透析到8M尿素中。 4如想得到更好的纯化效果,请适当延长孵育时间。 4如果购买的是C600792中压色谱柱,请根据实际使用仪器的要求进行柱机连接后再进行以上操作。
金斯瑞Ni-NTA亲和层析介质（产品编号L00250）是把NTA（氮川三乙酸）共价偶联到4%的琼脂糖介质上，再通过NTA的4个结合位点螯合Ni2+制备而成的亲和层析介质。Ni-NTA亲和层析介质的Ni2+脱落率非常低，它能耐受蛋白纯化过程中使用的很多添加剂，并且有着较高的蛋白结合能力和稳定性，因此Ni-NTA亲和层析介质非常适用于...
图4.SDS-PAGE图 1:包涵体,2:流穿液,3:50mM咪唑洗脱液,4:400mM咪唑洗脱液。 (3)不同金属离子及洗脱条件对纯化效果的影响 使用Ni-NTA Agarose,His标签重组蛋白的上样量为10ml,用含有20、50、100、200、500mM咪唑的缓冲液3洗脱,缓冲液1和2均加入终浓度为1%的吐温80,其结果表明加入表面活性剂可以降低杂吸附...
如进行SDS-PAGE,样品中含6 M盐酸胍时必须透析 到8 M尿素中。 4 如想得到更好的纯化效果,请适当延长孵育时间。 4 如果购买的是C600792中压色谱柱, 请根据实际使用仪器的要求进行柱机连接后再进行以上操作。 4 以上柱体积特指柱料体积。 4 填料反复使用建议用于同种蛋白的纯化,以防污染。 在位清洗 在位清洗...
6、洗脱,色谱结果见图1,色谱各组分的SDS-PAGE果见图2Volfnl)图1.Ni-NTAAgarose纯化带His标签重组蛋白色谱图图2.SDS-PAGE图谱1、标准蛋白,2、上样液,3、流穿液,4:20mMe脱液,5:50mMe脱液,6:100mMe脱液,7:200mMe脱液,8:300mMt脱液,9:400mMt脱液。(2)使用Ni-NTAAgarose纯化His标签重组蛋白包涵体条...