各试剂与NI-NTA树脂的兼容性: DTT0.5 -1 mM β-mercaptoethanol20 mM TCEP5 mM reduced glutathione10 mM 变性剂urea8 M Guanidine-HCl6 M 去污剂Tween202% TritonX-1002% NP-402% CHAPS2% 其他添加剂ethanol20% Glycerol50% Na2SO40.1 M NaCl1.5 M EDTA0.2-1 mM EGTA0.2 mM citrate60 mM 溶液sodium p...
各试剂与NI-NTA树脂的兼容性详解：还原剂：DTE 5mM、DTT 5-1mM、β-mercaptoethanol 20mM、TCEP 5mM、reduced glutathione 10mM变性剂：urea 8M、Guanidine-HCl 6M去污剂：Tween20 2%、TritonX-100 2%、NP-40 2%、CHAPS 2%其他添加剂：ethanol 20%、Glycerol 50%、Na2SO4 1M、NaCl 5M、EDTA 2-1mM、EGTA 2mM...
PureCube Ni-NTA琼脂糖在DTT和EDTA存在下非常坚实,在稳定性测试中,将PureCube Ni-NTA琼脂糖置于DTT与EDTA浓度逐渐升高的环境中处理1小时。再用处理过的凝胶在重力层析柱中纯化大肠杆菌表达的GFP-His,凝胶的蛋白结合能力因存在DTT与EDTA而下降,但是衰减率平缓,即使在1.5 mM EDTA,凝胶依然具有其最大结合能力的54%。
一般情况下纯化蛋白用DTT，但是his-tag要避免用DTT，因为DTT会造成Ni/Co离子还原。所以用巯基乙醇。一般...
为了保证蛋白质的二硫键不被氧化。一般情况下纯化蛋白用DTT，但是his-tag要避免用DTT，因为DTT会造成Ni/Co离子还原。所以用巯基乙醇。一般来说巯基乙醇量的7倍和DTT效果相当。
Ni-NTA能在多种化学试剂的存在下进行标签蛋白的纯化。 这一特点使得我们可以放心的使用各种化学试剂对纯化过程进行优化。举个例子来说在市场上所有的6×His标签蛋白纯化试剂中,只有Ni-NTA可以兼容10 mM DTT. 点击以下链接,浏览Ni-NTA在化学试剂兼容性方面的最新数据full list of reagents compatible with Ni-NTA....
Ni-NTA琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质,通过活化偶联次氮基三乙酸(NTA),再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸(IDA)相比,具有更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性,如样品中含有1-10mM EDTA或1-10mM β-巯基乙醇或5mM DTT,可正常纯化;在螯合镍的情况下,也可以用0.1M NaOH清洗。 Ni-NTA琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨...
镍离子脱落或者剥离 按照填料再生的操作重新挂镍离子 填料呈现褐色 缓冲液中含有DTT等还原剂 参考附3适当降低还原剂DTT的浓度,或改用巯基乙醇 上样过程中蛋白发生沉淀 操作温度太低 室温下进行上样 蛋白发生聚集 在样品和所有缓冲液中添加稳定剂,如0.1%Triton X-100或Tween-20 Ver...
按照填料再生的操作重新挂镍离子 填料呈现褐色 缓冲液中含有DTT等还原剂 参考附3适当降低还原剂DTT的浓度,或改用巯基乙醇 上样过程中蛋白发生沉淀 操作温度太低 室温下进行上样 蛋白发生聚集 在样品和所有缓冲液中添加稳定剂,如0.1%Triton X-100或Tween-20...
基质4%琼脂糖 平均粒径90 μm（45-165 μm）保护液1×PBS（含20%乙醇）存储条件2-8℃ 保质期2娲⒋ 18个月 表2：Ni-NTA亲和层析介质可耐受试剂 变性剂表面活性剂还原剂盐其他 6 M 盐酸胍2%Triton X-100 20 mM β-ME 4 M MgCl250%甘油 8 M尿素2% Tween 20 1 mM DTT 5 mM CaCl2...