今天隆重介绍的就是当下测序的主要检测技术——高通量测序(Next Generation Sequencing,NGS),该技术可以实现多基因大规模平行测序,可以从根本上解决单基因遗传病因异质性、基因多、表型复杂造成诊断难的实际问题。NGS实验流程是一个文库制备→芯片捕获→测序→数据分...
NGS开创性地引入了可逆终止末端,从而实现边合成边测序(Sequencing by Synthesis),它在DNA复制过程中通过捕捉新添加的碱基所携带的特殊标记(一般为荧光分子标记)来确定DNA的序列。在NGS中,单个DNA分子必须扩增成由相同DNA组成的基因簇,然后进行同步复制,来增强荧光信号强度以读出DNA序列;而随着读长增长,基因簇复制的协同...
基因组DNA首先经过片段化处理,再加上接头序列,并环化形成单链环状DNA,随后使用的滚环扩增技术(Rolling circle amplification, RCA)可将单链环状DNA扩增2-3个数量级,所产生的扩增产物称为DNA纳米球(如图6.1,DNA nanoball, DNB),最终纳米球经过DNB装载技术固定在阵列化的硅芯片上。 Pattern array技术:华大基因测序芯片...
这边需要特别指出的是第二代测序结合微阵列技术而衍生出来的应用--目标序列捕获测序技术(Targeted Resequencing)。这项技术首先利用微阵列技术合成大量寡核苷酸探针,这些寡核苷酸探针能够与基因组上的特定区域互补结合,从而富集到特定区段,然后用第二代测序...
接下来是测序过程,NGS技术采用并行测序原理,即通过分割DNA或RNA样本为许多小片段,然后同时生成多个序列。常见的测序方法有Illumina、Ion Torrent和PacBio等。其中,Illumina技术是目前应用最广泛的高通量测序技术。它利用DNA或RNA的片段在特定的适配器上进行扩增,并在测序芯片上进行固定。然后,测序仪器会逐个测定每个适配器...
21世纪至今，NGS技术在多个领域得到广泛应用，包括基因组学、转录组学和表观遗传学等。通过文库制备、生成DNA簇、边合成边测序和数据分析四个主要步骤，NGS技术在生命科学研究中发挥了重要作用。随着技术的不断进步和成本的降低，NGS的应用范围将进一步扩大，数据分析技术的不断发展将提高NGS技术的准确性和...
T G C T A C G A T …根据每个DNA簇每轮反应读取的荧光信号序列,转换成相应的DNA序列 Hiseq 4000 采用四色荧光碱基识别系统碱基识别:通过荧光信号分析核苷酸序列 Illumina高通量测序技术特色每张测序芯片有8 个通道,每个通道可单独运行一个样品,也可以把多个样品混合在一起检测;一次实验可读取大于15 亿个碱基/...
NGS应用 | 测序技术原理与应用 杨继勇, 视频播放量 5263、弹幕量 2、点赞数 74、投硬币枚数 19、收藏人数 268、转发人数 50, 视频作者 感染诊断, 作者简介 ,相关视频:NGS应用 | 测序技术原理及其应用 杨继勇(2023-4),各位中医的神鬼们!收了你们的神通吧!!!,卵细
NGS有两种策略:基于合成(SBS)、基于连接(SBL),但归根结底,都是设法检测新加入的单脱氧核苷酸/寡聚脱氧核苷酸与上一轮反应结束后的旧多聚脱氧核苷酸发生的缩聚反应。 检测方法又分为光学的和电化学的两种。前者的原理实际上是高分辨率彩色光电转换(跟扫描仪没有本质区别),后者则通常是基于高灵敏度的微型离子传感器...