针对Western Blot(WB)实验中TLR4和NF-kB蛋白条带反亮的问题,提供了多种可能的解决方案,包括调整抗体浓度、缩短孵育时间、增加洗涤次数等.
对于非经典NFKB, WB检测p52生成；QPCR检测CXCL12/13的表达。
我们做蛋白定量用的是考马斯亮兰法。
1. 胞内和核内NF-kB的量，也就是要区别核蛋白和胞浆蛋白，这个可以用WB；2. 检测IkB的磷酸化，这个也可用WB，不过IkB有两个不同的泛素化位点作用不同，因此也不是很特异的方法；3. 最经典的还是要做EMSA，直接检测NF-kB与DNA的结合，这个应该是目前最权威的试验了，推荐！！
可以考虑往巨噬细胞RAW264.7模型中加药，然后用蛋白印迹或者elisa试剂盒检测nf-kappaB表达水平 如果显著...
在实验中,免疫荧光或免疫组化检测p65的入核,WB分别检测胞浆,以及核内磷酸化p65的含量变化,是NF-κB活性检测中说服力比较强的常用方法,检测细胞中IkBa蛋白的丰度,以及EMSA也是比较有用的证据。细胞中p65的磷酸化经不同刺激,结果也有差异。 06...
不知道大家在用wb检测细胞核蛋白NF-KB，用的p65抗体的时候有没有遇到这种情况，本来应该是65KD大小的条...
小鼠(Mouse)核转录因子(NF-kB)ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被核转录因子(NF-kB)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最...
Rockland/艾美捷 抗NFKB p65抗体已在ELISA、ICC、WB和IF中检测。NFkB凝胶位移分析在20µl反应中组装,反应中含有0.28 pmoles NFkB低聚物,在10mM Tris(pH 7.6)、50 mM NaCl、0.5 mM EDTA、1.0 mM DTT和10%甘油中。一些程序规定添加0.05%的NP-40。当使用纯化蛋白时,250-300 ng应足以产生凝胶移位复合物,而使...