转酶切反应体系的建立NEB 1. 建立一个标准的酶切反应 目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果...
• 标准体系温育 1 小时,省时酶切体系温育 5-15 分钟。 • 使用省时内切酶。 • 许多内切酶都可以用更少单位的酶消化16小时。 终止反应 若消化后的 DNA 不需要进行后续实验操作: • 用终止液终止反应 [50% 甘油、50 mM EDTA(pH 8.0)和 0.05% 溴酚蓝](如 NEB #B7021)...
1. NEB 酶为限制性内切酶，对目的片段特异性序列进行识别与酶切；
如图可见,EcoRI-HF(NEB #R3101)过夜酶切不会产生星号活性,即使在高浓度条件下依然如此。50 μl 反应体系中加入 1 μg Lambda DNA、不同浓度的酶以及相应的反应缓冲液,在 37℃ 条件下过夜酶切。M 为 1 kb DNA Ladder(NEB # N3232)。 高保真(HF ® )限制性内切酶列表更多...
1. NEB 酶为限制性内切酶，对目的片段特异性序列进行识别与酶切；2. Buffer的作用是维持反应体系的酸碱度的稳定。
NEB--推荐双酶切系统(最新版-修订).pdf,Select 1st Select 2nd GO enzyme: enzyme: % Activity in Enzyme Cat# Temp Supplied Supplements NEBuffer NEBuffer BSA SAM 1 2 3 4 BamHI* R0136 37°C NEBuffer 3 Yes No 75 100 100 100 KpnI* R0142 37°C NEBuffer 1 Yes No
NEB 酶为限返则山制性内切酶，盯判对目的片段特异性序列进行识别与酶切；漏中 2.Buffer的作用是维持...
NEB常用酶介绍
具有省时酶特性(Time-Saver™)的限制性内切酶 效率高,5-15 分钟实现快速酶切;纯度高,过夜酶切不降解。 无论您是在进行大量克隆的快速筛选还是进行过夜酶切,NEB 高品质的酶都会给您带来更大的便利。通常,进行限制性酶切时都需要在 50 μl 反应总体系中,加入 1 μl 酶反应 1 小时来消化 1 μg 纯化的...
继续切 或者换MBI的酶 它有通用的buffer 用2X的 不过NEB的酶是最好的了 没有必要换了 ...