由于只有在蛋白质相互作用时才会产生荧光素酶的活性,因此可以减少假阳性结果的产生。此外,该技术还可以用于活细胞中的实时监测,使其在细胞生物学研究中具有重要的应用前景。 然而,nanobit荧光素酶互补技术也存在一些局限性。例如,由于荧光素酶的活性依赖于ATP和氧气等因素,因此在一些特定的实验条件下可能会受到影响。
使用先前表征的SME-1 β-内酰胺酶和一组抑制剂结合蛋白之间的相互作用,在定义的生化条件下验证了NanoBiT 的准确性。在细胞中,NanoBiT 与 FRB/FKBP 的融合产生了与 NanoLuc 的线性特性一致的发光。使用蛋白激酶 A 和β-arrestin-2 评估的反应动力学是快速的、可逆的,并且对温度 (21–37 °C) 具有稳健性。 并...