目前采 用的单抗糖基化位点上寡糖检测方法为:运用特定的酶解反应(如使用肽N糖苷酶PNGase f)将糖基化位点上的寡糖切除下来,使用固相萃取等方法进行纯化,随后的检测包括:(1) 对纯化后的寡糖进行荧光标记(如2-AA,2-AB等荧光试剂),纯化后在配备荧光检测器的 液相色谱上使用HILIC或氨基色谱柱进行分离,对洗脱峰进行...
目前采用的单抗糖基化位点上寡糖检测方法为:运用特定的酶解反应(如使用肽N糖苷酶PNGasef)将糖基化位点上的寡糖切除下来,使用固相萃取等方法进行纯化,随后的检测包括:(1)对纯化后的寡糖进行荧光标记(如2-AA,2-AB等荧光试剂),纯化后在配备荧光检测器的液相色谱上使用HILIC或氨基色谱柱进行分离,对洗脱峰进行分析。
本发明提供了一种快速全面检测药用单克隆抗体N糖基化位点上的寡糖的方法,其步骤如下:1)样品寡糖酶解;2)2-AB衍生化溶液配置;3)寡糖的衍生化;4)衍生后寡糖的纯化;5)衍生寡糖的LC-荧光-ESI-MS分析。本发明的方法能够有效快速准确地对单抗N糖基化进行分析,有利于对药用单抗分子作用机理的分析以及生产质量控制。