对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜,不同的是对照加溶解药物的介质,而加药组加入不同浓度的药物。 2)每孔中的细胞数可以根据细胞生长的速度调整,并进行预实验调整浓度,太多敏感性降低,太少观察不到差异。 3)贴壁细胞加MTT前吸掉培养液,悬浮细胞可以不吸除培养液,再加入0.5%MTT,量为20ul/孔。
🟣 板子上要写好标记,板子和板盖都要写上序号,尽量避免写在孔上。🟠 加入MTT溶液时需要避光,并且此过程需要大量枪头,尽量提前准备好。🔵 用排枪将上清液去除时,不可触碰到底部细胞,可略微将枪头触碰底面并倾斜板身,一次性将上清液全部吸出。🟤 MTT有致癌性,实验时做好各种防护。🔴 为了节省甲臜增溶溶...
方法与步骤 (1)用0.25%的胰蛋白酶消化贴壁细胞,用相应的培养液配成单个细胞悬液,以每孔 10³~10⁴个细胞接种于96孔培养板中,每孔体积200μl; 然后将96孔培养板置入CO₂孵箱中,在 37℃、5%CO₂及饱和湿度条件下培养,根据实验目的和要求确定培养所需时间。 (2)培养一定时间后,每孔加入MTT溶液(5mg/...
在细胞生物学研究领域，准确测定细胞活力至关重要。MTT 比色法作为一种经典且广泛应用的方法，为科研人员提供了便捷有效的检测手段。MTT，即 3-(4,5 - 二甲基噻唑 - 2)-2,5 - 二苯基四氮唑溴盐，它可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），而死细胞此酶活性丧失，...
MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)是一种黄色水溶性化合物,可被细胞内酶系统还原生成紫色的可溶性甲硫唑酮(formazan)晶体,这种生成的晶体可以用光谱法测定其吸光度,从而间接反映细胞的活力。 MTT法的原理基于细胞代谢活性和酶系统的相互作用。正常活跃的细胞具有强大的代谢能力,...
在进行MTT法测定细胞活力实验时，需要注意以下关键事项以确保实验结果的准确性和可靠性。实验的应用范围广泛，包括细胞增殖测定、细胞毒性测定、细胞活性测定、药物筛选以及肿瘤放射敏感性测定。实验原理基于MTT（噻唑蓝），一种在活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶作用下转化为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜，而死细胞无...
MTT法测定细胞活力时，如果细胞经过药物处理后立即加入MTT，应尽快测定结果。这是因为MTT与细胞在短时间内会发生反应，从而影响测定的准确性。为了验证这一点，我们曾做过实验对比，将细胞处理后放置几天再测定光吸收值，发现与首次测定的结果差异显著，无法准确反映实验情况。因此，建议在处理细胞后立即加入...
3)MTT:以PBS配制成5mg./ml,抽虑除菌,保存在4˚C 4)DMSO(二甲基亚砜) 5)96孔板 6)酶联免疫检测仪 7)细胞培养箱 三、实验步骤(实用于贴壁细胞) 1)收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,分于96孔板,1×104/孔,细胞浓度可以调整。 2)置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁。 3)加入不同浓度的药物,如1、5、...
细胞活力测定——MTT法.PDF,细胞活力测定——MTT法 培养细胞活力测定 1 细胞克隆形成率实验 单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的 细胞群体形成肉眼可见的克隆。克隆形成率用来表 示细胞的增殖能力 克隆形成率比=克隆形成数/接种细胞数 缺点:操作繁