MST将荧光检测的精准性与热泳动的灵活性及灵敏度结合起来,快速、可信地检测分子间相互作用。 MST 测试时,由红外激光建立微观温度梯度场,通过荧光染料标记、荧光融合蛋白、色氨酸自发荧光等信号追踪,分子在微观温度梯度场中的定向移动就可以被探测和量化。MST 应用范围广泛,可用于检测小分子之间、蛋白和蛋白之间、多...
微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)是一种分析生物分子相互作用的技术。 MST技术是一种基于检测在温度梯度中的生物分子电泳迁移率的变化而检测生物分子间结合、解离过程,获取分子间相互作用的模式和动力学常数等方面信息的新技术,是近年来发展的研究生物分子相互作用的强有力工具,已广泛应用于药物筛选、信号转导...
得益于MST检测技术不依赖于分子量的改变,并且通过无标记的检测方式就可以在溶液中直接检测蛋白与小分子的相互作用,因此有效避免了固定蛋白干扰其检测活性,成功验证了API分子在GLUT9蛋白中的结合和抑制作用效果(图3),同时也揭示了小分子对GLUT9蛋白抑制作用的分子机制,为后续的相关药物设计和优化奠定了基础。 图3:MST...
MST技术上机检测的浓度可以低至pM-nM,保证DDX21为单体状态,进而获得准确的二聚体亲和力结果。此外,MST对缓冲成分没有要求,并且是检测达到平衡状态时的亲和力。因此,可以将葡萄糖作为缓冲成分加入到体系中,并且使葡萄糖和DDX21达到平衡后再进行检测。MST亲和力结果表明,葡萄糖显著抑制DDX21二聚化(降低了近7倍)。 图1...
1、进行亲和力检测前,确保蛋白聚集体样品的均一性 2、不同蛋白,样品的制备方法有差别 3、均一性样品制备后,应立即进行下游检测 02 蛋白聚集体标记 MST技术检测分子互作时,需要对蛋白聚集体进行荧光标记。通常外源标记的方式有三种:氨基标记、His-tag标记、半胱氨酸标记。
微量热泳动技术(MST)基于小分子与蛋白结合导致的分子构象、大小、电荷、水化层的变化进行亲和力检测。MST技术对检测的小分子的分子量下限没有限制,即便是离子与蛋白的互作也能轻松检测,同时也不受蛋白与小分子的分子量比值的限制,可以轻松检测蛋白与小分子及离子的相互作用。MST技术无需将蛋白固定在固相载体上,可以...
MST (Microscale Thermophoresis) 微量热泳动技术,是一种定量分析生物分子间相互作用的前沿技术。通过精确检测荧光变化,结合灵敏的热泳动现象,定量分析分子间相互作用。 实验时对互作分子中的一个分子进行荧光标记,使之成为非常灵敏的标签分子,在 MST 技术中称之为 Target;与之互作的另一个分子称之为 Ligand。Target...
微量热涌动(MicroScale Thermophoresis,MST)技术是一种用于检测生物分子间相互作用的分析方法,它具有多种优势,特别是在与传统的分子相互作用检测技术相比较时。 以下是MST技术的一些主要优势: 1.高灵敏度和精确性: MST技术通过检测生物分子在微观温度梯度中的热泳动行为来分析其相互作用。这种方法的高灵敏度允许检测到...
MST结果显示了抗抑郁药氟西汀(FLX)和GFP标记的TRKB在HEK293T细胞裂解液中的直接相互作用。 图2 FLX结合TRKB跨膜结构域 MST应用案例二 完整细胞与蛋白间的亲和力检测 如果研究对象是完整的细胞、细菌或者病毒,MST技术仍然可以应对。[1][2] 血小板膜含有多种蛋白质,这些蛋白质往往连接大量的糖链而成为糖蛋白。(GP...
微量热泳动技术(MST)通过检测ligand分子与Target(荧光标记蛋白)结合后形成的复合体在温度梯度场中泳动速度的变化从而达到检测分子间结合的亲和力的目的。分子在温度梯度场中的泳动速度与分子的大小、水化层及电荷情况有关,因此在检测小分子与蛋白互作时,MST技术对小分子的分子量大小没有要求,即便是离子与蛋白的互作...