图一、静脉给药后的mRNA-LNP在猪肝脏和非肝脏组织中的蛋白表达 图二、静脉给药后的mRNA-LNP在猪肝脏和非肝脏组织中的mRNA水平检测（图A）和肝脏毒性检测（图B）。2、骨髓和血液细胞中的表达：令人惊讶的是，研究还发现NanoLuc蛋白在骨髓中的造血干细胞（HSCs）、粒细胞以及循环的白细胞和血小板中也有表达（图三...
首先需要将mRNA-B9-hFc与LNP混合制备脂质纳米颗粒制剂。将SM-102、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、mPEG-DMG-2K以摩尔比50:10:38.5:1.5分散于无水乙醇中,而mRNA-B9-hFc与乙酸钠缓冲液混合,随后,利用微流控设备将混合的有机相和RNA-乙酸钠溶液以3:1的...
包封率是mRNA-LNP非常关键的指标,表示包裹在脂质纳米颗粒内部的RNA占全部RNA的比例,是确定LNP药物制剂精确给药剂量的基础!通过对其包封率的检测,不仅可以优化LNP相关的配方和包封参数,同时也可以监测mRNA-LNP稳定性随时间发生的改变。 对于包封率的检测,申基生物使用RiboGreen荧光染料可以检测到低至1ng/ml浓度的RNA,...
随后,进行了体内的 mRNA 递送实验,通过静脉注射载有 Fluc mRNA 的基于 CLP 的 LNP 来检测蛋白表达。结果显示,Q1L/IL 在肺部表达的蛋白质效率最高,与其他三种LNP相比有显著优势,而Q3L/IL 则在脾脏中蛋白表达的分布比例非常高(63.0%)。 / ...
冷冻电镜（Cryo - EM）观察 LNP 结构。细胞实验 HeLa 细胞培养、传代和转染培养 HeLa 细胞，用 mRNA LNP 转染，24 小时后用流式细胞术检测转染效率和 eGFP 蛋白表达水平。人外周血单个核细胞（hPBMCs）分离和 LNP 转染按伦理协议从加拿大血液服务中心获取 hPBMCs，分离培养后用 mRNA LNP 转染，用于细胞因子分析...
整体来看,动态光散射法(DLS)作为mRNA-LNP粒径检测的一种解决方案,具有快速、重复性好、准确性高的优势。因此,国内外法规均推荐使用动态光散射(DLS)用于mRNA-LNP平均粒径及粒径分布的检测。 耀海生物质量研究服务平台,目前已具备针对30多种mRNA原液或LNP制剂成品质量属性的方法开发和检测能力。检测项目覆盖质粒纯度、...
研究者基于质量源于设计(QbD)和实验设计(DoE)方法,开发并优化了HPLC-CAD分析方法以检测LNP脂质组分。 一、方法学简述 高效液相色谱(HPLC)与电雾式检测器(CAD)结合,是检测LNP脂质组分的推荐方法。2023年,美国药典USP更新的“Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality”草案中建议使用CAD检测器鉴别脂质组分、...
LNP-mRNA 产品中检测到的残留蛋白质杂质 酸水解-ID-LC-MS/MS 方法适合量化 DNA 特异性核碱基胸腺嘧啶的水平。mRNA 治疗产品中的残留 DNA通常是通过 qPCR 技术进行检测。胸腺嘧啶先前已被证明可通过类似的酸水解方法从 DNA 中释放出来。腺嘧啶可以作为脱氧核糖核苷酸的替代物,并将残留 DNA 与 mRNA 治疗产品区分开...
今天的文章,菌菌将分享mRNA-LNP粒径检测的方法——动态光散射(DLS)。 一、动态光散射(DLS)工作原理 动态光散射(DLS, dynamic light scattering),也成为光子相关光谱学(PCS),是一种成熟的非侵入技术。DLS能够检测小于1 nm粒度的颗粒,可用于测量亚微米范围内的分子与颗粒的粒度及粒度分布。DLS的检测原理为,悬浮的...
RNA疗法通过直接控制体内特定细胞内蛋白质的生成,在多种疾病的治疗方面具有巨大潜力。特别是使用脂质纳米颗粒(LNP)的非病毒载体递送mRNA,已成为一种有吸引力的治疗性蛋白质递送方法,因为mRNA的表达具有瞬时性,并且人工合成的纳米颗粒载体具有可重复给药的优势。目前,mRNA-LNP已在疫苗、基因编辑疗法、蛋白质替代疗法中...