利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了GFP-LC3指示技术: 无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中; 自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。 Ref: Autophagic flux disruption contributes to Ganoderm...
质粒来源:Addgene # 21074 ( 载体pEGFP-C1+mRFP;插入基因 Rat LC3B,GenBank ID: U05784 ) 背景:自噬为机体在亚细胞水平的“自我吞噬”,可以帮助细胞维持自身稳态及适应应激环境。近年来,自噬已成为生物学领域中的一个研究热点。迄今研究发现,自噬可以参与多种疾病的发生发展,例如肿瘤,心血管疾病,神经退行性疾病...
质粒来源:Addgene # 21074 (载体pEGFP-C1+mRFP;插入基因Rat LC3B,GenBank ID: U05784 ) 背景:自噬为机体在亚细胞水平的“自我吞噬”,可以帮助细胞维持自身稳态及适应应激环境。近年来,自噬已成为生物学领域中的一个研究热点。迄今研究发现,自噬可以参与多种疾病的发生发展,例如肿瘤,心血管疾病,神经退行性疾病等。
细胞自噬定位基因为大鼠的 LC3B 基因. 用 GFP-LC3 质粒观察 LC3 的分布,由日本科学家首先构建和推广.但是随即他们又对其提出了 质疑,因为 GFP 蛋白在酸性环境下绿色信号会减弱.因此,日本学者开发了一种双荧光的质粒, 即 ptfLC3,采取 RFP 和 GFP 两种荧光双标记.这种双标质粒的特点是:mRFP 用于标记及追踪 LC3,...
上海科远迪生物科技有限公司生产的mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株,最新报价:6500元/套,mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株质粒来源:Addgene#21074(载体pEGFP-C1+mRFP;插入基因RatLC3B,GenBankID:U0578
质粒来源：Addgene # 21074 ( 载体pEGFP-C1+mRFP；插入基因 Rat LC3B，GenBank ID: U05784 )背景：自噬为机体在亚细胞水平的“自我吞噬”，可以帮助细胞维持自身稳态及适应应激环境。近年来，自噬已成为生物学领域中的一个研究热点。迄今研究发现，自噬可以参与多种疾病的发生发展，例如肿瘤，心血管疾病，神经退行性...
1 材料和方法 1.1 试剂与仪器 DMEM 培养液购自 Gbico 公司,雷帕霉素购自生工生物工程(上海)股份有限公 司, GFP-LC3 质粒由本实验室构建。 mRFP-eGFP-LC3 质粒购自 Addgene(plasmid : 21074) [3] , Lipofactamine 3000 转染试剂盒购自 Life Technologies,LC3B 兔抗人多克隆抗体购自 Sigma 公司(#L7543),...
质粒来源:Addgene # 21074 ( 载体pEGFP-C1+mRFP;插入基因 Rat LC3B,GenBank ID: U05784 ) 背景:自噬为机体在亚细胞水平的“自我吞噬”,可以帮助细胞维持自身稳态及适应应激环境。近年来,自噬已成为生物学领域中的一个研究热点。迄今研究发现,自噬可以参与多种疾病的发生发展,例如肿瘤,心血管疾病,神经退行性疾病...
mRFP是一直稳定表达的,因而可以通过GFP与mRFP的亮点比例来评价自噬流进程。 优点:mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株可以稳定持续的表达mRFP-EGFP-LC3,能够有效地解决瞬转实验的效率低、周期长、操作繁琐、不稳定等问题,有利于保证实验结果稳定性与可重复性。mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系的出现,把自噬研究带入了一个新...