为降低非特异性荧光染色和线粒体毒性,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的Mito-Tracker Deep Red FM。3.贴壁细胞的线粒体染色:a.当细胞在细胞培养板或培养皿中培养至一定密度时,去除细胞培养液,加入步骤2中配制好的Mito-Tracker Deep Red FM工作液,37℃孵育15-30分钟。注:最佳孵育时间需根据...
为降低非特异性荧光染色,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的Mito-Tracker Deep Red 633。3.贴壁细胞的线粒体染色:a.当细胞在培养板或培养皿中培养至一定密度时,去除细胞培养液,加入步骤2中配制好的Mito-Tracker Deep Red 633染色液,37℃孵育15-30分钟。注:最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的...
2）待细胞生长到合适密度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针培养基。于特定的生长状态下孵育15~45min (具体孵育时间需根据细胞类型而定)3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片）或荧光酶标仪下观察。4．染色步骤（悬浮细胞)1)离心沉淀细胞，吸除上清。2)利用37℃预热的含探针培养基重悬...
1.取mitotracker deep red633(WM:543.58)一小包50微克,用DMSO配的1mM的储存液。 2.细胞爬片后,PBS洗10min,用含血清的DMEM培养基按500nM(即1:20),300nM,250nM,200nM,100nM稀释储存液,7度染30min,然后吸掉培养液换新的培养液,37度放10min后吸掉。甘油封片置于镜下观察。 3.细胞爬片后,PBS洗2*10min,...
步骤说明 1 储存液的配制 本品是以粉末形式提供,使用需将本品回温至室温。 之后使用细胞培养别的无水 DMSO , 将其充分溶解至终浓度 1 mM 。 本品M. Wt.= 543.58 g/mol ,换算下来, 50 µg 粉末只需加入 92 µL DMSO 即可得到 1 mM 储存液。可根据单次的使用量将储存液分装后放到 -20 ℃避光,...
它属于有机荧光染料,能够在活细胞中特异性地染色线粒体,使得研究人员可以直观地观察线粒体的形态、功能及其动态变化。Mitotracker系列探针包括多种颜色,如绿色(Mito-Tracker Green)、红色(Mito-Tracker Red CMXRos)和深红色(Mito-Tracker Deep Red FM)等,以适应不同的实验需求和多色标记实...
实验步骤: 1在PK Mito Red/ Orange/ Deep Red中加入100pL新鲜干燥的DMSO,混合均匀,得到250μM母液。 2将培养基预热至37℃,将PK Mito Red/ Orange/ Deep Red母液按照1000-5000倍稀释比例加入到预热的培养基中,稀释后的染液建议尽快使用,久置后可能导致部分染料分解或沉淀。
当细胞长至所需丰度,吸除培养液,加入37℃预热的MitoTracker® Deep Red FM染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液,即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或者进行后续的固定和透化步骤,见步骤4。 2)悬浮细胞的...
MitoTracker染色制备方法相对简单,以下是常用的实验步骤: 1.制备MitoTracker工作溶液:将MitoTracker染料按照所需浓度加入适量的溶剂,根据不同荧光染料的建议浓度来配制工作溶液。 2.固定和渗透化细胞:根据研究需要,将待测细胞固定在载玻片上,并使用适合的渗透化剂处理以提高染料的进入率。
其中,Mitotracker orange,red,and deep red这三种探针经透化(permeabilization)后仍能良好维持。在接下来免疫细胞化学(ICC)、原位杂交(ISH)或电镜实验的处理步骤中样本仍保留线粒体的活细胞染色形态。另外,Mitotracker探针去除病原细胞线粒体染色可能遇到的一些问题,因为一旦线粒体染色后,细胞即可被固定然后进行结果分析...