(1)独特的π字形杂交探针设计(含2-4个互补碱基对),既保证了靶标杂交的特异性,又可以为后续分支放大提供稳定的支撑结构;同时结合U型放大系统,实现信号上千倍放大,从而使其具有更好的特异性和更高灵敏度,相较于传统FISH方法(smFISH和HCR等),杂交效率更高、背景噪音更低和信号放大能力更强;且通过检测HeLa 细胞中...
三、引物探针设计 由于反转录后得到的cDNA 为(miRNA+RT引物)复合片段。 上游引物可以在miRNA自身序列上找,如果GC含量太低,可以在上游引物5’端加入GCGCC等的保护碱基;下游引物在RT引物的反向互补序列中找;也就是说:上游引物是每个miRNA所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法...
FISH检测结果显示circ-0001875主要位于细胞质中。综上所述,这些数据表明circ-0001875是一个位于NSCLC细胞质中上调且高度稳定的circRNA。 2► Circ_0001875 promotes the proliferation and metastasis of NSCLC cells both in vitro and in vivo 为了评估circ-0001875对NSCLC细胞生物学行为的影响,作者进行了体外功能...
探针设计位置有 3 个:完全与 miRNA 序列相同,在 miRNA 与 RT 引物的交叉点,完 全在 RT 引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况.至于探针要设计在那个位置, 根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多. 试验操作流程 1. RNA 提取 在以上两种 RT 引物中,Ologod(T)特异引物所需要的 RNA 尽量是用特殊...
在过去的lncRNA原位检测过程中,通常使用到荧光原位杂交法(Fluorescence in situ hybridization, FISH)或同位素原位杂交法。这两种方法分别使用荧光素或放射性同位素标记探针,通过探针与靶RNA序列互补的方法检测目标RNA。同位素法由于存在放射性物质,对...
三、引物探针设计 由于反转录后得到的cDNA为(miRNA+RT引物)复合片段。 上游引物可以在miRNA自身序列上找,如果GC含量太低,可以在上游引物5’端加入GCGCC等的保护碱基;下游引物在RT引物的反向互补序列中找;也就是说:上游引物是每个miRNA所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法...
生物芯片通过参考已有的数据信息,针对每个miRNA转录本设计探针,通过探针和转录本反转录产生的cDNA之间的杂交,判断不同样本之间的转录本表达差异。生物芯片本质上是核酸杂交,整个芯片系统也是一个封闭的系统,不能检测探针没有覆盖到的区域;而近些年来逐渐发展起来的小RNA测序,是一个开放的系统,理论上讲,按照流程,不管有...
典型如金刚石到四面体的互变异构,使荧光原位杂交(FISH)缔合更紧密、分析更灵敏;而对四面体顶点区的改造可缓解笼面张力,促成开普勒式的嵌套载体,实现毋须转染的控释。 除了上述被广泛报道的在体诊疗应用外,DNA四面体还具有另一特性,即在生理条件下对表面化学的重塑。当异质界面需要有序的氢键网络时,这就显得尤其有用...
fish技术服务 面议 RACE技术 面议 产品简介 miRNA-荧光定量检测服务是一类长度约19-24nt的非编码单链RNA,通过碱基互补配对的方式与靶基因的3’-UTR区部分或互补,剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译,从而起到转录后调控靶基因表达的作用。它广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中,调控生物体生长发育...
每孔加入200 μL预杂交液,37°C封闭30 min;预杂交同时,将杂交液在37°C中预热;避光条件下,把 2.5 μL 20 μM FISH Probe Mix储存液加入到杂交液中;弃去每孔细胞中的预杂交液,加入适量含有LncRNA MNX1-AS1探针的探针杂交液,避光,37°C杂交过夜;42°C,洗液I清洗每孔细胞3次,每次5 min,以降低背景信号...