对于MHC II类阻断实验,肿瘤细胞37℃在20毫克/毫升抗HLA DR,DP,DQ抗体(克隆TU39,从Biolegend公司)温育30分钟,或在相关同种型对照中温浴。然后,肿瘤细胞加入和没有附加洗涤的TIL(最终浓度在T细胞刺中激鸡尾酒约为0.5毫克/毫升)到共培养物中。进行聚合四聚体(肽-MHC多聚体的PE缀合并在内部产生HLA-A2限制性MART...
58.图4a至图4ii是说明hla ii类基因的相当表达水平的直方图的图形表示。将hla-dr及其衍生物在k562细胞中重构并用抗hla ii类单克隆抗体染色。使用抗hla ii类单克隆抗体克隆9-49(i3)检测所有dr等位基因的表面表达。开放直方图代表同型对照染色。59.图5a至图5l是显示经历用dr1l114w/v143m+2reps二聚体进行的离体...
Anti-HLA-A\B\C抗体同上1-10mgBiolegend311441(5mg)311442（25mg）5mg 4609；25mg 12038Ultra-LEAF Purified anti-human HLA-A,B,C Antibody anti-HLA-A,B,C - W6/32 (http://biolegend.com)Anti-HLA-DR抗体同上1-10mgBiolegend307666(5mg)307667（25mg）5mg 4609；25mg 12038Ultra-LEAF Purified anti...
然后将细胞悬浮于150μL含有抗CD8a(PE‑Cy7,1:200,eBioscience)和 CD4(APC,1:200,Biolegend)抗体的FAC缓冲液中,并在4℃孵育20分钟。将细胞洗涤两次并 使用FAC缓冲液离心,然后在最终体积为200μL的含7AAD的FAC缓冲液(Biolegend 1:200)中 送至流式细胞术试管。对LSRII(BDBiosciences)进行流式细胞术分析,...
FITC抗体(1μg/mL)和CD137‑PE抗体(1μg/mL)在4℃染色PBMC 10分钟。通过肽刺激激活诱导 的CD137表达允许使用FACS分选设备将抗原特异性T细胞分选到管中。 [0153]SCT多聚体形成:生物素化的SCT单体已成功用于至少三种不同的形式。首先,它们 已经用链亲和素‑藻红蛋白(PE)(BioLegend)四聚化,所述链亲和素...
anti-mouse CD8a Antibody(mCD8a BV711)购自Biolegend,货号100747; BamHI、BglII、EcoNI、SspI酶购自NEB,货号分别为R3136、R0144、R0521、R3132; 实施例1 MHC分子人源化小鼠 本实施例对非人动物(如小鼠)进行改造,使该非人动物体内包含编码人B2M和HLA-A2.1蛋白的核苷酸序列,得到经遗传修饰的非人动物体内可表达人...
对于MHC II类阻断实验,肿瘤细胞37℃在20毫克/毫升抗HLA DR,DP,DQ抗体(克隆TU39,从Biolegend公司)温育30分钟,或在相关同种型对照中温浴。然后,肿瘤细胞加入和没有附加洗涤的TIL(最终浓度在T细胞刺中激鸡尾酒约为0.5毫克/毫升)到共培养物中。进行聚合四聚体(肽-MHC多聚体的PE缀合并在内部产生HLA-A2限制性MART...
将以下抗体用于流式细胞术分析:pe缀合的抗ii类(9-49(i3))、apc-cy7缀合的抗cd4(rpa-t4,biolegend,san diego,ca)44、pe缀合的抗his标签(ad1.1.10,abcam,cambridge,ma)和fitc缀合的抗vβ22(immu 546,beckman coulter,brea,ca)。用活/死可固定近红外死细胞染色试剂盒465(thermo fisher scientific,waltham...
将以下抗体用于流式细胞术分析:pe缀合的抗ii类(9-49(i3))、apc-cy7缀合的抗cd4(rpa-t4,biolegend,san diego,ca)44、pe缀合的抗his标签(ad1.1.10,abcam,cambridge,ma)和fitc缀合的抗vβ22(immu 546,beckman coulter,brea,ca)。用活/死可固定近红外死细胞染色试剂盒465(thermo fisher scientific,waltham...
等位基因(如所示)的k562细胞的直方图。开放直方图代表同型对照染色。* p《0.05,通过学生t检验得到。条形和误差条代表一式三份实验结果的平均值 ± sd。进行至少2次独立实验。图1x至图1aa是直方图,显示了k562细胞表面上的用指示的抗hla ii类抗体检测到的野生型dp4和dp4l112w/v141m分子。没有ii类表达的对照细胞...