(1)MeRIP-qPCR不需要内参来进行样本间的均一化矫正 从结果的形式%(IP/Input)我们也可以看到,这个实验侧重看修饰的片段(IP样品qPCR结果)占总片段(Input样品qPCR结果)的比例,实验目的只是要得到这两者的比值就体现修饰水平,因此MeRIP-qPCR不涉及到普通的相对定量qPCR...
7、MeRIP-qPCR不能看出基因表达量? 可能有人会想:Input样品又没经过IP,qPCR操作不就与普通qPCR没什么差别,那么做了MeRIP-qPCR,不能得到基因表达量的结果吗?比如前面MeRIP-qPCR例子中A和B样品Input分别是1和1.5的结果可以用来看一下这个基因在两样品中的表达量有没有差异?——我们不知道,因为没有内参基因来计算,...
Merip-qPCR柱状图: meRIP-阳性质控柱状图 NC组meRIP-qPCR柱状图 Treat组meRIP-qPCR柱状图 Merip RNA 片段化图: Merip RNA 片段化图 分子生物实验 甲基化 m6A
与普通的qPCR有所不同,MeRIP-qPCR是验证某个目标基因上的某个修饰位点(以一小段区域的形式,MeRIP法精确不到单碱基)的修饰水平。得到的结果往往是一个%(IP/Input)的数值,它体现的是该位点的修饰水平(目标基因发生该修饰的转录本占该基因总转录本的比例),而普通qPCR验证的是某个基因的表达水平(共表达了多少转录...
首先我们需要明确的是,MeRIP-qPCR的目的是验证某个目标基因上的某个修饰位点(以一小段区域的形式,MeRIP法精确不到单碱基)的修饰水平。 得到的结果往往是一个%(IP/Input)的数值,它体现的是该位点的修饰水平(可以大致理解为:这个转录本表达了很多条,其中百分之多少是这个位点有修饰的?)需要与普通qPCR验证基因表达水...
122.手把手教你做MeRIP-qPCR并计算相对表达量 本文中,我们会为老师详细解析在做完m6A测序后,如何对差异甲基化的基因进行验证。简单来说就是IP后如何进行qPCR实验。文中的表述:MeRIP-qPCR与m6A-IP-qPCR等同。 【确定样本起始量和IgG】 在进行讲解之前,我们要回答的第一个问题就是,用多少RNA来做后期验证呢?举个例...
首先我们需要明确的是,MeRIP-qPCR的目的是验证某个目标基因上的某个修饰位点(以一小段区域的形式,MeRIP法精确不到单碱基)的修饰水平。 得到的结果往往是一个%(IP/Input)的数值,它体现的是该位点的修饰水平(可以大致理解为:这个转录本表达了很多条,其中百分之多少是这个位点有修饰的?)需要与普通qPCR验证基因表达水...
第四步：蛋白A/G磁珠结合。将蛋白A/G磁珠加入IP组中，孵育1小时，随后在磁力架上吸附磁珠，除去上清液，再进行洗涤和洗脱。第五步：RNA检测与验证。收集洗脱的RNA样本，进行反转录并进行qPCR验证。总结：m6A甲基化免疫共沉淀-qPCR（meRIP-qPCR）技术是一种高效研究mRNA m6A甲基化区域的方法，通过精准的...
MeRIP-qPCR 是m6A-IP-qPCR的另一种说法。所以从名称上我们就能发现,m6A-IP–qPCR基本和常规的RIP–qPCR相似。当然在讨论RIP–qPCR之前,我们先来看看常规的RT-qPCR 是如何计算相对表达量的。 关于RT-qPCR的方法学论文很多,所以这里关于实验部分就不细讲了。计算基因的绝对定量需要加入外参基因,所以暂且我们先来看看...
MeRIP-qPCR 是 m6A-IP-qPCR 的另一种说法。所以从名称上我 们就能发现,m6A-IP–qPCR 基本和常规的 RIP–qPCR 相似。当然在 讨论 RIP–qPCR 之前,我们先来看看常规的 RT-qPCR 是如何计算相对 表达量的。 关于RT-qPCR 的方法学论文很多,所以这里关于实验部分就不细 讲了。计算基因的绝对定量需要加入外参基因,...