不能。m13r和m13f引物不能用于扩增pet-28a上的目的基因片段。具体原因如下:m13r和m13f是通用引物,常用于PCR扩增目的基因片段的验证。这些引物通常与载体上的特定序列相匹配,用于检测插入片段的正确性或者进行测序反应。它们不是针对特定基因设计的特异性引物,因此不能用于扩增pet-28a上的任何特定基因片段。
我公司提供的PCR引物,为经过PAGE纯化的高质量多核苷酸,可以直接用于PCR和序列测定等实验。 ■ 序列 5'-TGT AAA ACG ACG GCC AGT -3' ■适用范围 适用于克隆在M13系列,pUC系列等载体的DNA片段的序列测定。 用户姓名:* 用户手机:* 电子邮箱: 单位名称:* ...
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做PCR都要考虑Tm值吧。M13引物一般是M13F, M13R;M13F(-47), M13R(-48)配对使用。如果做菌落PCR验证阳性克隆的话,如果只是把目的片段插入到多克隆位点处,这两对引物哪一对都可以的。如果是样品需要测序的话,由于接近引物的读出效果不好,如果克隆的位点接近CMS的两端,一般需要用M13F(-47), M13R...
由于Sanger测序法的局限性,通常刚开始的50bp-100bp测序不太稳定,通用引物不能距离克隆位点太近(建议大于50bp),否则有可能会导致部分目的片段测不出来。因此,T载体(pMD 18-T载体)的测序通常选择正向引物M13F(-47)和反向引物M13R(-48)而不建议选择M13F和M13R。
还可能是测序公司的失误。你应该使用的是PCR后连接载体后扩增出的重组质粒进行测序的。这样M13F是从一侧对插入片段进行测序。这边如果有问题,那么就可以使用M13R,也就是另一侧进行测序。这样就可以避开那段Poly A,让测序结果更加可信一些。说实话,你的问题中信息太少,很难做出太准确的回答。原因...
PMD20-T M13F(-47) M13R(-48) pEASY-T M13F/T7 M13R pUcm-T M13F/T7 M13R pCR2.1-TOPO M13F/T7 M13R pGEM-T(-Easy) M13F/T7 SP6/M13R pBS-T M13F/T7 T3/M13R pUC18(19)/118(119)/57 M13F(-47) M13R(-48) pET-*(His)(KAN+) T7 T7 Ter ...