lnp pka概念LNP-PKA,即磷酸酸化酶 A 的淋巴细胞核因子途径,是一种信号传导通路,广泛存在于多种细胞类型中。PKA 是一种重要的蛋白激酶,其活性受到多种因素调控,其中 LNP(淋巴细胞核因子)是一种重要的调控因子。LNP 通过结合 PKA 的调节亚基,影响 PKA 的活性,从而参与调控多种生物学过程,如细胞增殖、分化、迁移...
目前 pKa 的测定方法包括酸碱滴定法和 TNS 荧光法，其中 TNS 荧光法具有灵敏高且操作便捷的优点，已被广泛用于测量 LNP 的 pKa，该方法可用 96 孔板体系配合高灵敏的荧光酶标仪实现高通量检测。检测原理：TNS（2 - 对甲苯氨基 - 6 萘磺酸）在水溶液中是非荧光的，带负电荷，与阳离子脂类或聚合物结合并移动到...
图1. 双层水性囊泡结构 脂酸解离常数(pKa) 可电离阳离子脂质的酸解离常数(pKa)决定了LNP的电离行为和表面电荷,并进一步影响LNP的稳定性和毒性。 传统的永久电荷阳离子脂质如DOTAP(溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵)在早前用于核酸递送的研究中,极易与体内带负电荷的血清蛋白发生凝聚,将导致LNP被单核吞噬细...
了解可电离脂质的整体特性也有助于下一代可电离脂质的开发和设计。其中计算pKa(cpKa)是主要参数之一，可以通过计算机容易获得。可电离脂质的cpKa通常为9-10.5。最近研究表明，cpKa与实际pKa非常接近。可电离脂质的cpKa可影响相应LNP配方的整体pKa，当可电离脂质的cpKa约为8.5~10.5时，LNP的pKa大约为6~7。可...
为了确保适当的可电离脂质质子化,LNPs需要在低于可电离脂质表观pKa值(通常为~ 6.5)的酸性pH(~4)下制备,然后进行缓冲液/pH交换步骤。由于可电离脂类通常被设计成疏水链尾部基团的横截面积大于亲水性头部基团的横截面积,因此这些脂类呈现出倒锥几何形状(图2)。根据分子形状假说,这有利于核内核酸周围的可电离脂质形成...
4.脂酸解离常数(脂质pKa)是脂质在相同浓度下的电离和非电离形态的pH值。脂质pKa影响LNP的包封效率、疗效、传递和毒性。 对于RNA传递，脂质pKa一般在6-7之间。已经确定了不同给药途径的具体范围。静脉给药和肌肉给药的最佳脂质pKa范围分别为6.2-6.6和6.6-6.9。 5.水缓冲液的三个重要参数是它的组成、离子...
尾部 疏水性的尾部会影响pKa、亲脂性、流动性和融合性,从而影响纳米颗粒的形成和效力。通常,一个IL包含1到4个由8到20个碳原子组成的饱和或不饱和的疏水性尾部。不饱和程度已被证明通过调节膜不稳定相关方面影响核酸的递送。DLin-MC3-DMA有两条亚油基尾部,而ALC-0315和SM-102包含两个假定为锥形的分叉饱和尾部...
LNP 表观 pKa 主要测定方法: 目前pKa 的测定方法包括酸碱滴定法和 TNS 荧光法,其中 TNS 荧光法非常灵敏,且操作便捷,可用 96 孔板体系实现高通量检测,已被广泛用于测量 LNP 的 pKa 。 检测原理: TNS( 2- 对甲苯氨基 -6 萘磺酸)在水溶液中是非荧光的,带负电荷,与阳离子脂类或聚合物结合并移动到疏水环境中...
脂类的亲水头部基团在很大程度上影响了LNP配方的可电离常数(以下简称pKa),含有氨基基团被甲基基团取代的脂质通常表现出较高的基因沉默活性。此外,脂类的疏水尾也可以影响基因沉默活性和细胞活力。我们发现,与YSK12-LNP相比,用PH敏感性阳离子脂质制备的CL1H6-LNP,具有更高的基因沉默和细胞活力。有趣的是,CL1H6-LNP与...
这种基于可电离脂质LNP(iLNP)确保在酸性条件下有效包埋核酸,并降低在生理条件下循环过程中的毒性。进入内体/溶酶体(pH低于表面pKa),LNP可以再次带正电,以促进内体逃逸,将mRNA释放到细胞质中。研究发现,LNP的pKa值为6.2-6.5和6.6-6.9,分别有利于siRNA在体内的肝脏递送和...