制备分泌抗LC3.I杂交瘤细胞株,体内诱生腹水制备mAb,间接ELISA法测定其效价,辛酸一硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb.结果:成功克隆了LC3一I基因,并对其在E.coilDH5a进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子量Mr为20×10^3有特异条带,Westernblot验证表达产物具有一定的生物学活性.建立了3株稳定分泌特异性抗LC3-...
. 10 17 微管相关蛋 白 I 轻链 3( LC3) 的基 因表达及 单克隆抗体制备 张海,师长宏 ,赵勇 ,缪珊 ,张廷芬 ,伍静 (第 四军医大学 实验 动物 中心 , 药物研 究所 , 西安710032) 【 摘要l 目的 克隆 LC3 基因, 体外表达后制备抗 LC3 单克隆抗体 , 为自噬研究提供相关实验材料。方法 RT-PCR 方法从 ...
目的克隆LC3基因,体外表达后制备抗LC3单克隆抗体,为自噬研究提供相关实验材料.方法RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆LC3基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化E.coli DH5(进行诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定表达蛋白.蛋白纯化后免疫BALB/C小鼠制备LC3抗单克隆抗体.结果克隆了LC3基因,并对其在E.coli DH5...