上图MEF细胞在短时间的饥饿处理下(0.5h和2h),LC3-I减少,LC3-II增加;而在长时间饥饿下(4h和6h),LC3-I和LC3-II含量都减少了。 如果按照之前的LC3-II /LC3-I,可能会获得4h,6h自噬更强的结论,但事实上并不是这样的,通过加入溶酶体蛋白酶抑制剂如E64d和pepstatin A处理,我们可以得出结论,在0.5h自噬是最强的...
WB常见指标——自噬标志物LC3 摘要 LC3特点 实验要点 LC3A/B/C有细胞/组织类型分布特点 查询细胞/组织中各亚型的表达谱,选择合适靶标的抗体 LC3-I可转变为LC3-II 检测LC3-I和LC3-II使用LC3A,LC3B或者LC3A/B的抗体均可。 脂化、膜相关蛋白 超声确保充分裂解 小分子量蛋白 ~15%分离胶,0.22um印记膜转膜 LC3...
LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II 被半胱氨酸蛋白酶 Atg4B移 除后回收,位于内膜的 LC3-II 则与包裹的内容物一起,被溶酶体降解。 LC3A/B/C 有种属细胞/组织分布特点 LC3/Atg8 被具有蛋白内切酶活性的 Atg4在羧基端剪切,生成胞...
自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此可利用WB检测LC3-II/I比值的变化以评估自噬的强弱。此外自噬衔接物如sequestosome 1（SQSTM1，也称为p62）也可用于检测自噬，p62蛋白水平的多少与自噬强弱有着反比例关系。2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 ...
LC3-I通过Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE) 偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II被半胱氨酸蛋白酶Atg4B移除后回收,位于内膜的LC3-II则与...
LC3-I通过Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE) 偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II被半胱氨酸蛋白酶Atg4B移除后回收,位于内膜的LC3-II则与...
如果你按照LC3-II/LC3-I来分析,可能会得出4h和6h自噬更强的结论,但实际上并不是这样。通过加入溶酶体蛋白酶抑制剂如E64d和pepstatinA处理后,我们发现0.5h自噬是最强的,后面逐渐减弱。 总结📝总的来说,解读LC3的WB结果需要综合考虑多个因素:蛋白酶体抑制剂的处理、抗体的选择以及细胞培养条件等。记住这些小细节,...
这时隔壁热心的师兄告诉小优,想要观察自噬有没有参与,最简单的就是做下LC3的WB。WB这个小优可擅长了,三下五除二,就借(骗)到了隔壁实验室的LC3抗体。 还是先查查LC3再做吧,LC3是一种蛋白轻链3,是自噬过程的标志物。它的功能主要参与了自噬小体的形成, LC3前体分子被ATG4B剪...
小分子量、LC3-I 与 LC3-II 仅有 2 KD 差异,在 WB 中需注意: 使用高浓度分离胶(~15%,确认 Tris 缓冲液的 pH 值)进行分离; 转膜时,使用小孔径 0.22 μm 转印膜,湿转 70 V、1.5 h 即可。对于半干转(如 Trans-Blot Turbo System),则...
LC3-I通过Atg7 和 Atg3(分别对应 E1 和 E2 样酶)参与的泛素样反应,使磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE) 偶联,生成脂质化形式的 LC3,也称作 LC3-II,它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。在降解过程中,位于自噬溶酶体外膜的LC3-II被半胱氨酸蛋白酶Atg4B移除后回收,位于内膜的LC3-II则与...