💉 细胞裂解与蛋白溶解 由于LC3是脂化和膜相关蛋白,在细胞裂解时,可在冰上短暂超声,以促进蛋白溶解,使得LC3顺利从膜上解离。此外,LC3-II的分子量约16KD,LC3-I在电泳后停留在14KD处,两者均为小分子量蛋白,且差距仅2KD。因此在WB时要注意使用高浓度分离胶进行分离(建议约15%),转膜时使用小孔径0.2um的NC膜,...
线粒体自噬时,内质网膜包裹损伤的线粒体形成自噬体,此时LC3-I蛋白被修饰形成LC3-II蛋白,LC3-II蛋白促使自噬体与溶酶体融合,完成损伤的线粒体降解。研究人员选取
LC3 I是未修饰的形式,而LC3 II是经过磷酸化和脂化修饰的形式。LC3 II在自噬过程中会转移到自噬体膜上,因此LC3 II的水平可以反映自噬的活性。 2. 免疫印迹法:常用的检测LC3的方法是免疫印迹法。首先,需要制备细胞提取物,并使用蛋白质浓度检测方法确定提取物的蛋白质浓度。然后,将相同量的蛋白质加载到SDS-PAGE...
LC3是自噬标志物,自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。 pro-LC3;立刻C末端被ATG4水解切割掉一段多肽,暴露甘氨酸,这个是LC3-I,胞浆分布。自噬过程中,LC3-I在ATG7和ATG12-ATG5-ATG16L作用下(和泛素修饰过程很像),...
摘要 正文 在进行自噬研究时,提取蛋白进行 Western Blot 实验,检测 LC3-I 和 LC3-II 几乎是必做的实验,那么,进行 LC3 检测时,需要注意哪些要点呢?我们一一道来。 LC3: 从何处来?往何处去? LC3/Atg8 被具有…
LC3-II水平的变化常被用来研究自噬的活性和程度。 三、LC3蛋白的表示方法 1. 免疫印迹法 免疫印迹法是最常用的检测蛋白表达水平的方法之一。研究人员通常通过免疫印迹法来检测细胞中LC3-I和LC3-II的水平变化,进而判断细胞的自噬活性。 2. 免疫荧光染色法 免疫荧光染色法是通过对细胞进行荧光标记,观察LC3蛋白在细胞...
还是先查查LC3再做吧,LC3是一种蛋白轻链3,是自噬过程的标志物。它的功能主要参与了自噬小体的形成, LC3前体分子被ATG4B剪去C端的5肽,裂解形成胞质形式LC3-I。然后被APG7L / ATG7激活,转移至ATG3并偶联脂酰乙醇胺(PE)以形成膜结合形式LC3-II它可以附着到自噬体(autophagosome...
LC3 的主要功能是参与自噬过程。自噬是一种重要的细胞生理过程，通过将细胞内的有害或老化的细胞器和蛋白质降解，从而维持细胞内环境的稳定性。LC3作为自噬过程中的关键调控因子，参与了自噬囊泡的形成和自噬相关膜的结合。在自噬过程中，LC3存在两种形式，即LC3-I和LC3-II。LC3-I是未修饰的形式，主要存在于胞浆中...
还是先查查LC3再做吧,LC3是一种蛋白轻链3,是自噬过程的标志物。它的功能主要参与了自噬小体的形成, LC3前体分子被ATG4B剪去C端的5肽,裂解形成胞质形式LC3-I。然后被APG7L / ATG7激活,转移至ATG3并偶联脂酰乙醇胺(PE)以形成膜结合形式LC3-II它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上,是自噬体的结构蛋白。怪不...