由于LC3是脂化和膜相关蛋白,在细胞裂解时,可在冰上短暂超声,以促进蛋白溶解,使得LC3顺利从膜上解离。此外,LC3-II的分子量约16KD,LC3-I在电泳后停留在14KD处,两者均为小分子量蛋白,且差距仅2KD。因此在WB时要注意使用高浓度分离胶进行分离(建议约15%),转膜时使用小孔径0.2um的NC膜,采用恒流200mA,转膜40min...
LC3-I 和 LC3-II 是小分子蛋白,虽然理论上LC3II分子量更大,由于带负电的PE改变了LC3II的性质,使其疏水性更强,导致其在电泳中迁移率更高。所以,LC3II电泳后停留在更小分子量(约14kDa)。 5.由于LC3-I 与 LC3-II 分子量小,又仅有 2 KD 差异,WB注意选用高浓度分离胶(约15%),转膜使用0.22μm转印膜,湿...
自噬发生时，LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切，产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中，LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工，产生分子量为 14kD 的 LC3-II，并定位到自噬小体中。LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益...
还是先查查LC3再做吧,LC3是一种蛋白轻链3,是自噬过程的标志物。它的功能主要参与了自噬小体的形成, LC3前体分子被ATG4B剪去C端的5肽,裂解形成胞质形式LC3-I。然后被APG7L / ATG7激活,转移至ATG3并偶联脂酰乙醇胺(PE)以形成膜结合形式LC3-II它可以附着到自噬体(autophagosome...
LC3-1和LC3-II是小分子蛋白,LC3-I的分子量约16KD,由于LC3-II接合了PE基团,所以理论上,LC3-II的分子量比LC3-1更高。但是,由于带负电的PE改变了LC-II的性质,使其疏水性更强,导致其在电泳中迁移率更高,所以,LC3-II在电泳后,停留在了更小分子量(约14KD)处。小分子量、LC3-1与LC3-II仅有2KD差异,在WB...
该基因的产物是神经元微管相关的MAP1A和MAP1B蛋白的一个亚基，它们参与微管组装，对神经发生很重要。 对大鼠同源物的研究暗示了该基因在自噬中的作用，该过程涉及细胞质组分的大量降解。一篇文献说，LC3-II疏水极性较强，所以电泳迁移率比LC3-I快。LC3-II的实际分子量比LC3-I大，但是表观分子量较小...
但是表观分子量较小，在SDS-PAGE电泳中，LC3-II分子量定量为14kD，LC3-I分子量定量为16kD。
因此,在研究自噬过程中,LC3-II的表达水平通常被用作自噬活性的指标。 LC3分子量的确定是通过SDS-PAGE电泳技术进行的。SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离技术,其原理是利用聚丙烯酰胺凝胶对蛋白质进行分离。在这个过程中,蛋白质会被SDS(十二烷基硫酸钠)等电点聚焦到凝胶上,并在电场作用下沿着凝胶移动。移动速度与蛋白...
LC3抗体检测抗原表位位于LC3的N端，由于PE基团结合导致N端区域构象变化，抗体对LC3-II亲和性更高，LC3-II/ LC3-I 比值存在较大误差。LC3-I对反复冻融更为敏感，需用新鲜制备样品上样，以防止LC3-I检测不到。LC3-I和LC3-II分子量有2KD差异，但在WB中需使用高浓度分离胶进行分离，转膜时注意使用小...