mRNA的帽结构可维持体内稳定性,促进蛋白的翻译。加帽率是mRNA疫苗或药物的关键质量指标,带帽结构的mRNA占比可影响mRNA的免疫原性和翻译效率。 本期文章菌菌将分享基于RNase H的mRNA加帽率检测方法,涵盖探针设计、酶切处理(前处理)、基于LC-MS的寡核苷酸分析。菌菌主要参考了CDE、WHO指导原则,以及美国药典USP推荐的...
图2 LC-MS加帽率检测图谱(上:TIC图;下:去卷积图谱) 不同实验人员用本试剂盒进行mRNA样品处理,得到12份供试品溶液,然后进行加帽率检测,12份供试品溶液的加帽率检测结果RSD为0.3%;因此,申基mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)方法稳定,重复性良好。 图3 mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)...
当前已建立的加帽率检测思路为:采用酶切方式(RNase H或核酶)获得5’端加帽或不加帽的寡核苷酸序列,随后对不同大小的寡核苷酸片段进行分离与相对定量分析,方法包括尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(尿素变性PAGE)、高效液相色谱(HPLC)、液相质谱联用(LC-MS)或毛细管电泳(CE)等,从而定量分析mRNA的加帽率。 其中较为成熟...
图2 LC-MS加帽率检测图谱(上:TIC图;下:去卷积图谱) 不同实验人员用本试剂盒进行mRNA样品处理,得到12份供试品溶液,然后进行加帽率检测,12份供试品溶液的加帽率检测结果RSD为0.3%;因此,申基mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)方法稳定,重复性良好。 图3 mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)...
CN116426610A1.一种LC‑MS法准确定量mRNA加帽效率的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1) 使mRNA与寡核苷酸结合,得到复合物;(2) 使用核糖核酸内切酶切割所述复合物,随后对切割产物进行纯化和回收,得到具有5’端寡核苷酸目标物,其中核糖核酸内切酶切割后产生且仅产生一个酶切位点;(3) 采用LC‑MS定量mRNA加帽...
本发明涉及生物工程领域,具体地涉及一种lc-ms法准确定量mrna加帽效率的方法。 背景技术: 1、作为一种治疗性或预防性的药物产品,mrna药物必须依照法规要求进行深入的分析表征。国家药监局发布的《新型冠状病毒预防用mrna疫苗药学研究技术指导原则》,提到对于mrna体外合成需要进行过程和产物的控制检测,包括加帽率、加poly...
当前polyA尾的检测分为两种思路: ①与加帽率的分析策略类似,酶切后纯化回收3’端polyA尾,随后通过毛细管电泳(CE)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、高效液相色谱(HPLC)或液相色谱质谱联用(LC-MS),对polyA尾进行定性和定量分析。 ②基于二代或三代测序技术表征polyA,已报道的测序方法包括TAIL-seq、PAL-seq、FLAM...
当前polyA尾的检测分为两种思路: ①与加帽率的分析策略类似,酶切后纯化回收3’端polyA尾,随后通过毛细管电泳(CE)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、高效液相色谱(HPLC)或液相色谱质谱联用(LC-MS),对polyA尾进行定性和定量分析。 ②基于二代或三代测序技术表征polyA,已报道的测序方法包括TAIL-seq、PAL-seq、FLAM-...
[0005]目前常用的加帽率检测方法有凝胶电泳、液相色谱(HPLC)、免疫学方法以及液相色谱质谱联用(LC‑MS)等。对全长的mRNA直接进行分析往往由于分子量太大而无法得到精确表征, 因此需要一个成熟的前处理方案。对于凝胶电泳, 利用是否成功加帽的mRNA在凝胶中的印记不同区分加帽成功的短链和失败的短链, 该方法对于样...
运用技术:LC-MS/MS蛋白质谱鉴定(由辉骏生物提供技术支持,点击查看服务详情)● 研究概述 长链非编码RNA (lncRNAs)与大多数典型的mRNA相似,通常是5 '帽子和3 'polyA结构。然而,这项新研究鉴定了一种新型的、与snoRNA相关的lncRNA,命名为LNC-SNO49AB,它包含两个C/D盒snoRNA序列SNORD49A和SNORD49B,具有5 '帽子...