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,引物T7promoter与T7terminator各0.2μM,TaqDNA聚合酶5U。PCR条件(1)95°C预变性5min;(2)94°C变性50s;(3)55°C退火60s;(4)72°C延伸120s,步骤(2)~(4)共30个循环;(5)最后72°C延伸5min,4°C保存。PCR产物经内切酶DpnI37°C消化3h后经过琼脂糖凝胶电泳分析后切胶回收。将回收的PCR产物通过T4连接...
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