效率的研究,我们对P.putidaKT2440的电转化条件进行了深 入的研究,获得了更好的转化效率,此方法有助于P.putida KT2440以及其他假单胞菌更高效地转化获得外源DNA [6~7] . 1材料与方法 1.1材��� 1.1.1菌种和质粒P.putida �putida �putida �菌株来自美国基因研究 ...
电转化的方法已经广泛的应用于哺乳动物细胞,革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,酵母细胞等。如上所说P.putida KT2440是最具特征性的模式环境微生物菌株,也是利用引入外源基因来产生化学物质的模式菌株,所以研究该菌株高效率的电转化方法对于该菌株和其他假单胞菌引入外源DNA具有重大的应用意义。 1995年Cho等报道了P.putida ...
恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440是模式环境微生物菌株,也是异源表达的良好宿主菌.高效率的电转化方法对于基因的引入及后续实验非常关键.通过条件优化,建立了高效的电转化方法.EM培养基培养菌体至D600nm=0.6～0.75,冰冷的3mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,pH=7.0)的缓冲液洗涤菌体3次,菌体浓缩300倍,50μ...
恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法 下载积分: 10000 内容提示: 应用与环境生物学报 2010, 16 ( 3 ): 432~434Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X2010-06-25DOI: 10.3724/SP.J.1145.2010.00432恶臭假单胞菌KT2440( Pseudomonas putida KT2440)是模式环境微生物菌株[1~2], 也是迄今遗传研究阐述得最...
putida KT2440后培养条件的选择 径的电转杯中,以 1.2 kV、200 Ω、25 μF 的条件电击转化. 将 感受态制备条件同上,缓冲洗涤液用上述效率最高的 1 mL的SOC混匀后加至 15 mL聚丙烯离心管,以,以30 ℃、、220 3 mmol/L HEPESmmol/L HEPES ,质粒转化条件相同,转化后用1 mL的SOC -5 、 - 4 r/min ...