Fig. 1 Strategy for the generation of knock-in medaka and generation of Tg[vacht-hs:lRl-GFP] strains. (a) For the generation of knock-in transgenic fish, sgRNA1 (for genome digestion), sgRNA2 (for plasmid digestion), donor plasmi...
Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系，研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技术操作规程，主要目的就是：解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。海星生物一站式解决细胞基因功能研究纯合/杂合敲入细胞系。超过...
and this approach is one of the most important methods for agricultural and biomedical applications. However, expression and secretion of a protein varies because transgenes are integrated at random sites in the genome. In addition, distal enhancers are very important for transcriptional...
5、同源臂的模板序列:左右同源臂建议以待突变的目的细胞基因组为模板扩增,避免不同细胞基因组差异导致左右同源臂不同源,降低HDR效率[10]。 Knock-in实验的成功,除了donor的选择,实验之前保证sgRNA的特异性,验证sgRNA的切割活性对于Knockin实验的成功也非常重要,这些设计方法与验证方法与前几期敲除中的方式一致,小伙伴...
载体构建：将sgRNA序列插入到载体中，同时确保载体能够表达Cas9蛋白。3. 制备供体DNA 供体模板设计：供体DNA包含目标插入序列和两侧的同源臂（与目标基因的上下游序列同源）。供体DNA构建：通过PCR扩增或合成方法获得供体DNA模板。4. 细胞转染 细胞选择：选择适合的细胞系进行基因编辑实验。转染方法：通过电穿孔、脂质体...
基因敲除(Knock out)和基因敲入(Knock in)是现代分子生物学中重要的基因编辑技术,它们为研究基因功能和疾病机制提供了有力手段。 基因敲除是指通过特定的技术手段使细胞或生物体中的某个基因失去功能。常见的方法如 CRISPR/Cas9 技术,通过设计针对目标基因的向导 RNA(sgRNA),引导核酸酶对基因进行切割,然后细胞通过非...
5、同源臂的模板序列:左右同源臂建议以待突变的目的细胞基因组为模板扩增,避免不同细胞基因组差异导致左右同源臂不同源,降低HDR效率[10]。 Knock-in实验的成功,除了donor的选择,实验之前保证sgRNA的特异性,验证sgRNA的切割活性对于Knockin实验的成功也非常重要,这些设计方法与验证方法与前几期敲除中的方式一致,小伙伴...
修复后的基因突变,功能丧失,称之为基因敲除(Knock out,KO);通过HDR修复DSB时,细胞修复系统会将额外提供的一个与靶DNA两侧同源的外源片段作为模板,在DSB处合成与同源序列互补的基因序列,由于外源片段中携带待敲入的突变或目的基因,因此就可以在基因组中精确地引入点突变,或者插入目的基因,称之为基因敲入(Knock in,...
基因敲除和敲入(Knock out and knock-in),定制服务 基因敲除和敲入技术是现代分子生物学和遗传工程领域的强大工具,对深入理解基因功能、基因敲除旨在通过特定的手段使生物体基因组中的某个特定基因失活或缺失。在细胞层面,常用的技术包括基于同源重组原理的传统基因敲除方法以及近年来广泛应用的 CRISPR-Cas9 系统介导的...
构建CRISPR - Cas9 敲入载体系统 将Cas9 蛋白编码基因和 gRNA 序列整合到适合的载体中,例如质粒载体。与此同时,供体 DNA 模板可以构建到另一个独立的载体中,或者通过其他方法(如寡核苷酸等)引入细胞中。 细胞转染或其他导入方式 将构建完成的CRISPR-Cas9载体系统及供体DNA模板导入目标细胞。常用的导入方法包括脂质体转...