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将上清液与150μl Ni2+-树脂(预先用缓冲液B平衡过的)混合,在室温平缓搅拌条件下培育30分钟。该树脂是Chelating Sepharose Fast Flow(Pharmacia),按制造商的说明书制备的。将分批的制备物在4℃以700×g离心5分钟,弃去上清液。用10ml缓冲液B冲洗树脂两次(分批)10分钟,重悬浮于1.0ml缓冲液B中,加样到一次性柱上。
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