1、细胞准备(贴壁细胞):将细胞传至共聚焦皿,并缓慢摇动至均匀,培养至80-90%。 2、JC-1染色工作液配制:取50μL JC-1(200×)加入8mLPBS稀释JC-1,再加入2mL JC-1染色缓冲液(5×),混匀后即为JC-1染色工作液。 3、洗涤:弃去培养基,用PBS洗2-3次。 4、染色:加入1mL JC-1染色工作液,并充分混匀。
线粒体膜电位检测(JC-1)实验教程。#线粒体膜电位检测 #细胞凋亡 #实验室 #科研狗的日常 #信天翁GOONIE - RNA提取小能手于20240916发布在抖音,已经收获了39个喜欢,来抖音,记录美好生活!
6. 用2 mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞,之后室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清; 7. 重复步骤6); 8. 用0.5 mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞,即可进行后续的流式分析。注意:请马上进行流式定量分析,此细节很重要。 数据分析:含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测;含有绿色JC-1单体的凋亡或...
JC-1染料(线粒体膜电位探针)MitoProbe JC-1 检测试剂盒 结果与发绿色荧光的膜电位较低的线粒体相比,活性线粒体显示出更亮的红色荧光信号。红/绿荧光信号比的变化可用于确定健康与去极化的线粒体。 激发/发射...
不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化,常用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。 二、实验步骤 (1) 收集细胞:细胞悬液转入离心管中,1000rpm离心5min收集细胞,弃上清。 (2) PBS洗涤细胞:加入3ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞,1000rpm离心5min,弃上清。沉淀震荡混匀。 (3) 细胞计数:移取10微升在血...
流式JC-1线粒体膜电位检测 一、实验介绍 JC-1有单体和多聚体两种存在状态,在低浓度时以单体的形式存在,高浓度时以多聚体形式存在,两者的发射光谱不同,但均可在流式细胞仪绿色(FL-1)通道检测出绿色荧光,JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内,正常健康线粒体的膜电位(△ψ)具有极性,JC-1依赖于△ψ的...
JC-1法检测线粒体膜电位,以及检测线粒体膜电位的操作步骤! 4、对于贴壁细胞: 注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,应先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。 吸除6 孔板培养液,根据具体实验如有必要可以用 PBS 或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入 1ml 细胞培养液。细胞培养液中可以...
通过测定JC-1的荧光强度比值,可以反映线粒体膜电位的高低。 具体实验步骤如下: 1.将细胞或组织块离心,去除上清液,用PBS洗涤一遍,离心。 2.将细胞或组织块加入含有1μM的JC-1的PBS缓冲液中,室温下孵育30分钟。 3.离心洗涤一遍,去除上清液。 4.将细胞或组织块加入含有PBS缓冲液的离心管中,用流式细胞仪或荧光...
2.JC1 的添加:将 JC1 添加到细胞培养液中,使其与细胞接触。 3.荧光信号的检测:使用流式细胞仪对细胞进行检测,通过 FL-1 或 FL-2 通道检测 JC1 的荧光信号。 4.数据分析:根据检测到的荧光信号强度,分析线粒体膜电位的变化。 三、JC1 的应用优势 相较于其他线粒体膜电位检测方法,JC1 具有以下优势: ...
染色步骤 使用JC-1进行线粒体膜电位检测的步骤通常包括细胞准备、JC-1染色、洗涤和荧光检测等几个环节。具体的步骤可能会根据实验条件和设备的不同而有所差异,但基本流程通常是: 细胞准备:将细胞铺板在多孔培养板上,然后在适宜的条件下培养过夜。 JC-1染色:取一定体积的细胞悬液,加入JC-1工作液,在适宜的温度和...