IP-MS实验的完整流程通常包括以下几个部分：（1）材料获取：细胞或组织。（2）蛋白提取：可根据目的蛋白的特性加入不同类型的IP裂解液及抑制剂。如：非磷酸化蛋白可不添加磷酸酶抑制剂；IP背景高，选用裂解度高的裂解液；目的蛋白IP不下来，选用裂解度低的裂解液等。（3）Beads结合抗体孵育：对应的抗体与Beads结合...
①对照组,一般是转染空载的细胞或者IP抗体同种属空白的IgG抗体。 ②IP实验对照组的设置需要遵循控制变量原则,即除了改变一个条件使对照组无法亲和纯化诱饵蛋白以外,其他所有实验条件、试剂种类及用量需与实验组保持一致。 ③设置对照组的意义是为了排除非特异性蛋白的结合。 2.IP-MS数据如何解读及候选蛋白如何选择? ①...
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。, 视频播放量 130、弹幕量 0、点赞数
免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是研究蛋白质相互作用的重要技术，能够深入了解细胞信号传导和生物学功能。选择适用于IP-MS分析的最佳实验方案包括抗体选择、条件优化和对照设定等。IP-MS技术的不断发展将为我们解密蛋白质相互作用的奥秘，推动生物学和医学领域的进步。在未来，我们期待IP-MS分析与其他技术的融合，为蛋白质...
IP-MS实验通常从细胞或组织样品的裂解开始。 相比具有级联放大反应的WB实验,质谱检测的灵敏度在大多数情况下要稍低一些,此外,与特异性检测靶标蛋白的WB不同,质谱检测理论上会对样品中的所有蛋白成分进行检测,因此用于质谱检测的IP实验相比传统IP-WB所需起始细胞量更多。
在目前的IP-MS实验中,通常以蛋白的定量差异筛选相互作用蛋白。通过差异倍数和P值筛选是最通用的做法,而P值仅在3次及以上重复数据中才有意义,在单次实验中无法计算。 以Nature上发表的一项新冠病毒蛋白互作组学研究中的部分蛋白质组定量数据为例,提取其中病毒N蛋白相关的IP实验组和对照组数据,以相同的定量筛选标准筛...
在早期的IP-MS实验中,往往通过蛋白成分鉴定的方式筛选互作蛋白。即通过质谱检测分别获得实验组和对照组样品的蛋白鉴定列表,将实验组中鉴定到而对照组中未鉴定到的蛋白筛选为靶标蛋白的互作蛋白。 但这种数据分析方法在目前已不太适宜。一方面,随着质谱仪器性能和检测灵敏度的提升,即使是极微量的非特异性结合或清洗残留...
通过一次IP-MS实验,能高通量的鉴定和筛选到多个与要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分),从而拥有属于自己的专属蛋白质相互作用数据库,能够进行更深入的生物学功能和分子机制的研究。 实验步骤 用Lysis Buffer裂解细胞,可以适当加上超声辅助,或者在冰上放置30 min,每10 min吹吸一次细胞,...
IP-MS效果评估:评估IP-MS实验效果,提升后续实验成功率,缩短试错周期; 互作蛋白筛选:筛选鉴定诱饵蛋白的相互作用蛋白,辅助选择关键互作蛋白; 动态互作组学:分析不同实验条件下与诱饵蛋白相关的蛋白相互作用的动态变化。 技术原理 通过亲和纯化方法(例如:免疫沉淀、Bio ID等)富集待研究的目的蛋白及其相互作用蛋白,然后与...
7. 做Co-IP或者IP-MS实验时,稳定转基因材料和原生质体/烟草叶片应该怎么选择? 如果实验条件允许,一般是推荐使用稳定转基因材料去做实验,这样能更加准确地反应植物体内真实的相互作用,如果实验条件不允许,例如研究的物种没有稳转体系或者赶时间,就可以选择原生质体或者烟草叶片进行实验。 8.进行Co-IP或者IP-MS实验时...