而IP-MS(Immunoprecipitation-Mass Spectrometry)就是目前发现和揭示PPIs/PTMs的主流技术方案。 一、IP-MS的原理 IP-MS即免疫沉淀-质谱联用技术,是一种基于质谱技术的分析方法,通过用特定抗体捕获目的蛋白,然后用质谱仪对免疫沉淀后的复合物进行高通量分析,从而获得蛋白质的定量和定性信息。 其原理是通过亲和纯化的方...
在近年来发表的IP-MS案例中,通常每组实验至少会设置3-4次重复实验。通常组学类型的论文期刊对此要求较严格,但若后续会经过多种其他方法对鉴定到的互作蛋白进行验证,而仅以IP-MS实验作为前期预实验,则无重复也可接收,但这种情况下由于其假阳性结果比例的升高,其互作蛋白筛选和验证的工作量也会急剧提升。 3、质谱检...
在近年来发表的IP-MS案例中,通常每组实验至少会设置3-4次重复实验。通常组学类型的论文期刊对此要求较严格,但若后续会经过多种其他方法对鉴定到的互作蛋白进行验证,而仅以IP-MS实验作为前期预实验,则无重复也可接收,但这种情况下由于其假阳性结果比例的升高,其互作蛋白筛选和验证的工作量也会急剧提升。 3、质谱检...
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步骤...
免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是研究蛋白质相互作用的重要技术，能够深入了解细胞信号传导和生物学功能。选择适用于IP-MS分析的最佳实验方案包括抗体选择、条件优化和对照设定等。IP-MS技术的不断发展将为我们解密蛋白质相互作用的奥秘，推动生物学和医学领域的进步。在未来，我们期待IP-MS分析与其他技术的融合，为蛋白质...
IP-MS效果评估:评估IP-MS实验效果,提升后续实验成功率,缩短试错周期; 互作蛋白筛选:筛选鉴定诱饵蛋白的相互作用蛋白,辅助选择关键互作蛋白; 动态互作组学:分析不同实验条件下与诱饵蛋白相关的蛋白相互作用的动态变化。 技术原理 通过亲和纯化方法(例如:免疫沉淀、Bio ID等)富集待研究的目的蛋白及其相互作用蛋白,然后与...
IP-MS,即免疫沉淀(IP ,Immunoprecipitation)结合LC-MS(液相色谱-质谱联用,蛋白质组学研究的核心工具),是筛选和发现目的蛋白(target)在细胞中新的互作蛋白或者新的翻译后修饰的主流技术方案。 通过一次IP-MS实验,能高通量的鉴定和筛选到多个与要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分),从而...
在IP-MS实验中,质谱检测环节对于实验组和对照组是一致的,其差异主要体现在IP环节。目前常用的对照组设计方案主要有以下三种。 方案一通常能获得最好的IP和质谱检测效果,也是目前IP-MS实验中最常用的方案。但若某些实验要求尽量避免对细胞体系的刺激,或希望鉴定到更接近生理状态下、生物学意义更明确的蛋白相互作用,则...
1、实验组和对照组 在任何实验中,对照组的设置都是最关键的环节之一。控制变量是对照组设置的重要原则,在IP-MS中也是如此。在IP-MS实验中,质谱检测环节对于实验组和对照组是一致的,其差异主要体现在IP环节。目前常用的对照组设计方案主要有以下三种。