IP-MS在差异蛋白筛选中的应用非常广泛。它可以帮助科学家发现由于生物过程、疾病或其他因素引起的蛋白质表达变化。例如,在疾病研究中,科学家可以将正常组织与疾病组织进行比较,通过IP-MS鉴定差异蛋白。这些差异蛋白可能是疾病的标志物,可以被用来辅助诊断、评估疾病进展和发展新的治疗方法。 此外,IP-MS还可以应用于蛋白...
MS 2DE技术是一种将分子标记蛋白通过膜电泳(IEF)和蛋白质凝胶法进行分离的技术,以筛选出具有表达水平变化的表型产物。阳性/阴性电泳用于识别膜中的蛋白,并在反应后可以用于测定不同体系中表达水平的差异。 MS法原理筛选差异蛋白的主要优势在于分析快速,易于操作,效果显著,且不受蛋白质表达量限制,适用于大量样品的蛋白...
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步骤...
IP-MS即免疫沉淀-质谱联用技术,是一种基于质谱技术的分析方法,通过用特定抗体捕获目的蛋白,然后用质谱仪对免疫沉淀后的复合物进行高通量分析,从而获得蛋白质的定量和定性信息。 其原理是通过亲和纯化的方法,利用特异性抗体富集细胞内的靶蛋白,通过加入能够与抗体结合的protein-A/G(预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上),...
根据IP-MS定量数据,在IP实验组中较IP对照组中显著较高的蛋白即被鉴定为靶标蛋白高可信的相互作用蛋白。由于IP实验的富集原理,IP-MS中显著差异蛋白的筛选标准相较常规蛋白质组学通常更高。可以以差异倍数>10,P value<0.01作为相互作用蛋白的筛选标准。 常见问题及数据结果评估 在目前较为理想的IP-MS的结果中,每个...
根据IP-MS定量数据,在IP实验组中较IP对照组中显著升高的蛋白即被鉴定为靶标蛋白高可信的相互作用蛋白。由于IP实验的富集原理,IP-MS中显著差异蛋白的筛选标准相较常规蛋白质组学通常更高。可以以差异倍数>10,P value<0.01作为相互作用蛋白的筛选标准。
根据IP-MS定量数据,在IP实验组中较IP对照组中显著升高的蛋白即被鉴定为靶标蛋白高可信的相互作用蛋白。由于IP实验的富集原理,IP-MS中显著差异蛋白的筛选标准相较常规蛋白质组学通常更高。可以以差异倍数>10,P value<0.01作为相互作用蛋白的筛选标准。
各种蛋白通过高度有序地、精确的相互作用,形成一个个复杂的、动态的网络,完成了系列生命活动。在本期视频中,我们将介绍一种寻找相互作用蛋白的高效工具——IP-MS!👍👍主要内容包括:①蛋白互作研究策略比较:假设驱动策略 vs数据驱动策略。②AP-MS方法分类:GST Pul
由于IP实验的富集原理，IP-MS中显著差异蛋白的筛选标准相较常规蛋白质组学通常更高。可以以差异倍数>10，P value<0.01作为相互作用蛋白的筛选标准。理想的IP-MS实验会通过特异性靶向目的蛋白以检测更接近生理状态下的蛋白相互作用，但这种检测准确性很大程度上会受到目的蛋白内源表达水平低或抗体效价低等因素的干扰。
在目前的IP-MS实验中,通常以蛋白的定量差异筛选相互作用蛋白。通过差异倍数和P值筛选是最通用的做法,而P值仅在3次及以上重复数据中才有意义,在单次实验中无法计算。 以Nature上发表的一项新冠病毒蛋白互作组学研究中的部分蛋白质组定量数据为例,提取其中病毒N蛋白相关的IP实验组和对照组数据,以相同的定量筛选标准筛...