In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15-20bp),然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为:①利用PCR技术将质粒线性化;②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因;③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusi...
In-Fusion技术被称为无缝克隆技术。其操作流程通常是通过对质粒PCR获得线性化载体;通过PCR,在目的基因片段的两端插入与线性化载体两端相同的碱基序列。然后将两者PCR产物相混合,在In-Fusion酶的作用下,凭借其3'→5'外切核酸酶活性,从线性化DNA的3'端起始切除15个核苷酸,进而暴露出互补的单链区域,最终促使插入片段与...
选择能够扩增所选克隆载体骨架的引物,去除载体中将会被插入片段替换的部分。 反向PCR用于融合克隆 单插入片段克隆的引物设计 单插入片段的融合克隆需要进行PCR反应,该反应扩增目标插入片段,并添加于载体退火所需的核苷酸。这通过设计包含模板特异性部分和载体特异性尾部的PCR引物来实现。 模板特异性引物用于扩增目标插入片段...
In-Fusion无缝克隆的目标不仅仅是简单的连接,更是拓展无限的可能! In-Fusion升级后性能得到显著提升 In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD性能比较。分别使用In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD将五个不同的插入片段(大小从405 bp到1,005 bp不等)同时克隆到一个经反向PCR线性化的2.7 kb的载体中,每组克隆...
In-Fusion克隆原理基于同源重组,是一种无缝克隆方法。以下是其详细原理: 同源重组原理:In-Fusion克隆与传统PCR产物克隆的主要区别在于,载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基。这样,通过PCR得到的产物两端就会分别带上15-20个与载体序列同源性的碱基,这些同源序列能够依靠碱基间的互补配对作用形成环状结构,从而无需酶...
In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15～20bp),然后用In-Fusion酶(能识别双链线性化DNA片段5'→3'末端任意16个碱基,使其降解)处理即可实现无缝连接。其操作步骤如图。请回答下列问题:(1)为获得线性化质粒,除了图示利用PCR方...
In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15～20bp),然后用In-Fusio
In-Fusion克隆技术:基因工程的'分子胶水' 在基因工程实验中,传统限制性内切酶克隆技术常受限于酶切位点,而In-Fusion技术的出现彻底改变了这一局面。这项基于同源重组原理的无缝克隆技术,通过15-20bp的同源序列即可实现基因与载体的精准连接,被誉为分子生物学的'智能胶水'。 核心技术原理 In-Fu...
无缝克隆技术不同于传统的酶切连接方法,它利用载体和插入片段末端的同源序列,在特定酶的作用下,可对任意载体的任意位点随心所欲的插入外源序列。这仿佛打开了克隆实验的“任意门”,也开启了克隆实验的新时代。 Takara公司的In-Fusion技术一直默默深耕相关市场,其In-Fusion HD系列试剂已助力无数科研人员顺利突破克隆实验...
In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术的关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(同源序列,通常为15~20bp),然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接,相关操作如图所示。回答下列问题:(1)过程①是利用PCR技术将质粒线性化,为了保证扩增后的产物是图中所示的线性化质粒,应该选择引物___。(2...