获得重组HSV病毒的经典方法是选择tk基因作为同源臂,将外源基因表达盒插入到HSV1基因组中,经过筛选获得重组病毒。 我们实验室建立了一套基于粘粒系统的HSV1重组HSV1病毒方法,直接用分子克隆的方法在HSV1基因组中插入外源基因表达单位。本实验室曾将4.5kb的lacZ基因表达盒(CMV-lacZ-polyA...
首先,通过用来自pegfp-c1(clontech)的egfp基因替代质粒ppep100(p.spear,northwesternuniversity赠送)(pertel等人,virology279(1),313-24(2001))中的cag启动子(cmv增强子/鸡β-肌动蛋白启动子/嵌合的内含子)和兔β-球蛋白polya区域之间的gh基因,构建质粒pcag-gfp。然后将i-scei-aphai插入pcag-gfp的snabi位点以产...
18.根据本发明的实施例,所述ccl19基因设置于icp34.5基因的第134位核苷酸和第724位核苷酸之间,使得构建的hsv-1携带ccl19。 19.根据本发明的实施例,进一步包括cmv和polya。 20.根据本发明的实施例,所述cmv与所述ccl19基因可操作地连接。 21.根据本发明的实施例,所述polya设置于所述ccl19基因的3’端核苷酸与icp34.5...
首先,通过用来自pegfp-c1(clontech)的egfp基因替代质粒ppep100(p.spear,northwesternuniversity赠送)(pertel等人,virology279(1),313-24(2001))中的cag启动子(cmv增强子/鸡β-肌动蛋白启动子/嵌合的内含子)和兔β-球蛋白polya区域之间的gh基因,构建质粒pcag-gfp。然后将i-scei-aphai插入pcag-gfp的snabi位点以产...
最后,将得到的JΔNI5重组BAC中的 GW盒通过利用AatII‑PsiI 片段的Red‑介导的重组用EGFP基因替代,包括质粒pCAG‑GFPKAN 的 CAG和polyA序列。用通过利用表1中列出的分别的F1,F2和R引物(分 别为63‑65,66‑68, 23 23 CN 113278653 A 说明书 21/38 页 和69‑71)的PCR产生的靶向的I‑SceI‑...
PolyA信号通常用于增加聚腺苷酸化效率, 导致增加的mRNA水平和改善的转基因表达。[0144]在一些实施方案中, 载体包含第一或第二合成编码序列, 而没有任何另外的和/或非功能性序列(例如, 可能在受试者中表达的隐蔽ORF)。这在转录的UTR中是特别有益的, 以预防在受试者中产生可能诱发不期望的适应性免疫应答的载体...