小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平。用纯化的小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)抗体包被微孔板，制...
操作步骤: Ⅰ 实体组织蛋白的提取 1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作; 3...
本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为抗人High mobility group protein B1单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过...
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为: a. 将具有专一性的抗ti固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗ti b. 加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结 c. 加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结,由于塑胶孔盘上...
其通过在胶乳微球表面交联hmgb1抗体,当抗原与交联有hmgb1抗体的胶乳微球结合后,能够在短时间内迅速聚集在一起,从而改变反应溶液的吸光度,通过直接测定反应溶液的吸光度值来反应被测抗原的浓度,相较于elisa法,省却了elisa法反复孵育和洗板等繁琐操作步骤,几分钟就能获得结果,省时省力;并且,操作步骤的简化也相应地避免...
7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热; 8.ELISA实验中标准品和样本检测时建议作复孔; 9.应将未用的酶标板放回原铝箔袋中,置2-8℃保存; 10.显色液对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下; 11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中; ...
严格杂交条件的优选实例是在约45℃在6x氯化钠/柠檬酸钠(=SSC)中的杂交条件,接着在50℃至65℃下在0.2x SSC、0.1%SDS中进行一次或多次洗涤步骤。技术人员知道,这些杂交条件根据核酸的类型以及例如当存在有机溶剂时关于缓冲液的温度和浓度而不同。例如,在“标准杂交条件”下,温度根据浓度为0.1至5x SSC(pH 7.2)...
优选的,所述步骤(4)ELISA方法检测血浆HMGB1水平,具体包括以下过程: (4-1)按照人HMGB1ELISA试剂盒说明书操作,酶标板的每个孔中先加入100μL样品稀释液,再加入标准品和血浆样品10μL,37°C水浴24h; (4-2)洗涤后每孔加入100μLPOD-溶剂,室温2h; (4-3)洗涤后每孔加入100μL底物溶液,100μL底物溶液包括50μ...
操作步骤 1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,...
人高迁移率族蛋白1(HMGB1)酶联免疫elisa试剂盒操作步骤 1.标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终...