组氨酸标签(His-tag)是由6~10个组氨酸组成的短肽,分子量很小,不会遮盖融合蛋白中其他蛋白的表位和结构域,也不会影响蛋白的结构和功能。带有His标签的蛋白,与琼脂糖凝胶或磁珠上的Ni2+等螯合金属离子形成配位键特异性的结合,而被纯化。 01 His标签蛋白纯化原理 His标签蛋白纯化通常采用固定化金属离子亲和层析(IMA...
His-Tag蛋白纯化原理:组氨酸(His)的残基上带有1个咪唑基团,可以和Ni2+、Co2+等过渡金属离子形成配位键而选择性的结合在金属离子上,这些金属离子能够用鳌合配体固定在层析介质上,因此带有His标签的蛋白在经过装配了金属离子的层析介质时可以选择性的结合在介质上,而其他的杂质蛋白则不能结合或仅能微弱结合。结合在...
His-标签蛋白纯化主要基于固定化金属离子亲和层析(IMAC)原理。在正常或变性(如8M尿素)条件下,His标签蛋白与琼脂糖凝胶或磁珠上的Ni²⁺、Co²⁺等金属离子形成配位键,从而实现特异性结合。这些金属离子固定在层析介质上,而His标签蛋白则选择性附着。通过提高缓冲液中咪唑的浓度,可以竞争性洗脱得到高纯度的目标...
Histag蛋白纯化是一种利用特定的标签与其配对的抗体来纯化目标蛋白的技术。Histag蛋白纯化的基本原理是通过在目标蛋白上添加一个可以与特定抗体结合的特殊标签,然后将该蛋白与特定抗体结合在一起,通过特定的技术方法,将其从其他杂质中分离出来。标签可以是多种形式,如His-tag、Flag-tag、GST-tag等,而抗体则是特定的...
His-tag蛋白纯化是一种广泛使用的蛋白质纯化技术,它利用金属亲和层析(Metal Affinity Chromatography, MAC)的原理来纯化带有组氨酸(Histidine, His)标签的蛋白质。His-tag通常由6到10个组氨酸残基组成,通过遗传工程方法融合到目标蛋白的N端或C端。His标签对某些金属离子(如镍Ni^2+、钴Co^2+、铜Cu^2+等)有很强的...
His标签蛋白纯化的核心原理是基于金属离子亲和层析(Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography, IMAC)。这种方法利用His标签与特定金属离子(如镍Ni2+、钴Co2+、铜Cu2+等)之间的亲和作用来纯化带有His标签的蛋白。 2.亲和机制 金属离子的选择:金属离子被固定在层析介质(如树脂或磁珠)上,通常使用Ni2+或Co2+,因为...
His标签蛋白纯化原理 His标签蛋白纯化通常采用固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化的方法,主要利用介质配体螯合的金属离子吸附纯化表面带组氨酸残基的蛋白。由于His标签可与多种金属离子(如 Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+,Fe2+等)发生特殊的相互作用,所以可利用蛋白质表面的特性,使之被吸附在凝胶柱上,从而达到分离纯化蛋白的...
免疫原性低:His-tag的免疫原性相对较低,可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体; 联合使用性强:与其他的亲和标签构建成亲和标签,并可用于多种表达系统,纯化的条件温和; 适用范围广:his标签融合蛋白的适用范围也较广,即可用在非离子型表面活性剂存在的条件下纯化,也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用...
IMAC原理已经说明只要是带组氨酸、色氨酸或半胱氨酸残基的蛋白都可以被吸附,所以要想得到好的纯化效果,必须选择好纯化的条件,通常带组氨酸蛋白都可 以在天然情况下被镍琼脂糖凝胶或镍NTA琼脂糖凝胶吸附,但是如果标签折叠在蛋白内部不容易暴露,这样就难纯化,如果镍琼脂糖凝胶都不能吸附,可以在样品 和平衡缓冲液中加1...
His标签蛋白纯化是一种利用多组氨基酸序列（6-10个His残基）构建的小肽HHHHHH（His-tag）与镍离子亲和柱之间的相互作用，实现对含有His-tag蛋白的选择性吸附、洗脱和纯化的方法。这种方法特别适用于在体外表达系统中表达的重组蛋白。首先，需要通过重组融合表达技术将目的基因构建成含有His-tag的重组蛋白。