(6)杂蛋白是目的蛋白的截断蛋白:检查是否存在可能的内部翻译起始位点(若 HisTag 序列构建于目的蛋白 C 端),或翻译提前终止(若 HisTag 序列构建于目的蛋白 N 端);避免目的蛋白在纯化过程中降解,如保持在 4℃进行操作,使用蛋白酶抑制剂等。 珠海舒桐可提供从密码子优化、载体构建到重组蛋白表达及
1.蛋白不结合柱子: 检查His-tag是否暴露(可能被包埋,需优化表达条件)。 确保镍柱未失活(避免反复冻融或长时间干燥)。 2.杂蛋白多: 优化洗涤缓冲液的咪唑浓度。 增加洗涤次数或体积。 3.蛋白沉淀: 纯化后立即透析或添加稳定剂(如甘油、DTT)。 五、举个栗子 纯化一个30kDa的His-tag蛋白: 裂解缓冲液:50mM...
众所周知，His tag（组氨酸标签）技术在蛋白质纯化领域占据着举足轻重的地位。这种技术常被用于分离和纯化重组蛋白，成为生物化学和分子生物学研究中的得力助手，助力科研人员高效获取目标蛋白并推动相关研究的发展。在上世纪70年代，蛋白质分离和纯化技术尚处于初级阶段，迫切需要更高效、更纯净的分离方法。金属螯合亲和层...
His-Tag 蛋白纯化磁珠(Magarose-IDA/NTA/TED)针对纯化 His 标签蛋白而研制的一种新型纯化介质,具有高效、快速、方便等特点,可通过磁分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行 His-tag 蛋白的纯化。 二、产品特性 产品名称 Magarose-IDA/...
01采用 His 标签进行蛋白纯化时,为何杂质含量偏高? 可能原因 1:蛋白酶部分降解目的蛋白 原因阐述:在蛋白纯化过程中,蛋白酶可能处于活跃状态,从而对目的蛋白发起攻击并造成部分降解,致使最终获得的蛋白产物中混有较多杂质。 解决对策:向反应体系中添加多种蛋白酶抑制剂,凭借抑制剂对蛋白酶活性的抑制作用,减少目的蛋白被...
上期介绍了蛋白纯化的三种方法，目前实验中最常用方法的是His-tag亲和层析。His-tag非常小对目的蛋白本身特性几乎没有影响且免疫原性较低，纯化的目的蛋白可以直接注射动物，另外，还可与其他亲和标签构成双亲和标签，应用于多种表达系统，因此是蛋白纯化的首选标签。本期小编就来详细讲讲His-tag镍（Ni）柱亲和层析的...
His Tag纯化基于组氨酸(His)残基上的咪唑基团与过渡金属离子(如Ni²⁺、Co²⁺)形成配位键的特异性结合。这些金属离子被固定在层析介质上,当带有His Tag的蛋白通过层析柱时,它们会选择性地结合在介质上,而杂质蛋白则无法或仅能微弱结合。通过逐步提高缓冲液中的咪唑浓度,可以实现His Tag蛋白的竞争性洗脱,从...
Mag-Beads His-Tag蛋白纯化磁珠是针对纯化His标签蛋白而研制的一种新型纯化材料,可通过特有的磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行His-tag蛋白的纯化。 特点1. 直接对粗蛋白进行纯化,降低了设备、人力、时间成本,并更适合大规模蛋白...
本产品使用便捷,通常以1:100的比例把蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X)加入裂解液中,即可用于His-Tag蛋白纯化,并有效抑制蛋白降解。 不同类型的蛋白提取物中含有不同类型的蛋白酶。例如,哺乳动物细胞提取物中通常含有高丰度的丝氨酸蛋白酶,细菌细胞提取物通常含有较多的丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶,哺乳动物...
His-Tag蛋白没有完全被洗脱 额外增加几毫升的elution buffer进行洗脱 样品制备和洗涤过程中发现流出液中存在His-Tag蛋白 样品和结合缓冲液中咪唑浓度太高,使用低浓度的咪唑。 确定样品中螯合剂或强还原剂的浓度不要太高。 组氨酸标签可能暴露不充分;对包涵体,可用尿素或盐酸胍对去折叠的蛋白进行纯化。减少样品的稀释,...