His-tag,即组氨酸标签,是一种在生物学研究中广泛应用的纯化标签。它由六个或更多连续的组氨酸残基构成,这些组氨酸残基可以人工合成并首尾相连,形成具有特定功能的标签。His-tag可以插入到目的蛋白的C末端或N末端,从而不影响蛋白质的结构和功能。作为一种分子量仅为约0.84KD的小标签,His-tag具有...
(5)优化金属离子:纯度不够主要是是因为宿主蛋白中一些含有His标签的天然蛋白也结合在了柱子上,那可以尝试更换成结合能力较弱的Co2+,使得杂质蛋白无法结合,进而提高蛋白的纯度。 (6)杂蛋白是目的蛋白的截断蛋白:检查是否存在可能的内部翻译起始位点(若 HisTag 序列构建于目的蛋白 C 端),或翻译提前终止(若 HisTag ...
在N端放置标记的另一个优点是,由于大多数内蛋白酶在识别位点的C端或附近切割标记,可以更干净地去除标签蛋白。 如下图所示:组氨酸重组蛋白构建的时将His标签放在目的蛋白的N端,后跟相应的蛋白酶酶切位点,其N-C端的结构为:His-蛋白酶酶切位点-目的蛋白。通过His标签在柱上富集重组目的蛋白,再采用相应的蛋白酶进...
His-Tag 蛋白纯化磁珠(Magarose-IDA/NTA/TED)针对纯化 His 标签蛋白而研制的一种新型纯化介质,具有高效、快速、方便等特点,可通过磁分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行 His-tag 蛋白的纯化。 二、产品特性 产品名称 Magarose-IDA/...
组氨酸标签也称His-tag,是一种最简单、应用最广泛的纯化标签,具有六个或更多连续的组氨酸残基,其可插入目的蛋白的C末端或N末端。一是能构成表位利于检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸标签的特点可总结为以下几点: 1.His标签分子量小,只有~0.84K...
His Tag（组氨酸标签）是蛋白质重组技术中常用的一种标签，由6到10个连续的组氨酸（His）残基组成，其中，最常用的His标签是6xHis标签。该标签的分子量较小，约为0.8 kDa，通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。His Tag在蛋白质纯化和检测中起着重要作用，具有以下特点和用途：特点 分子量小：His Tag的分子量小...
表1. 不同蛋白纯化标签介绍 浓缩的精华,纯化的领头羊 His-Tag 为何会逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。其主要优势在于: 高序列兼容性:N-端的His-tag与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达; 小序列影响小:His-tag非常小,His-tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响,不会改变目的蛋白本身的...
上期介绍了蛋白纯化的三种方法，目前实验中最常用方法的是His-tag亲和层析。His-tag非常小对目的蛋白本身特性几乎没有影响且免疫原性较低，纯化的目的蛋白可以直接注射动物，另外，还可与其他亲和标签构成双亲和标签，应用于多种表达系统，因此是蛋白纯化的首选标签。本期小编就来详细讲讲His-tag镍（Ni）柱亲和层析的...
His-tag蛋白纯化是一种广泛使用的蛋白质纯化技术,它利用金属亲和层析(Metal Affinity Chromatography, MAC)的原理来纯化带有组氨酸(Histidine, His)标签的蛋白质。His-tag通常由6到10个组氨酸残基组成,通过遗传工程方法融合到目标蛋白的N端或C端。His标签对某些金属离子(如镍Ni^2+、钴Co^2+、铜Cu^2+等)有很强的...
His标签长作为融合表达的首选,其原因主要有: 1,HIS-Tag本身的特性对目的蛋白没有影响,不会形成二聚体; 2,分子量较小,只有0.84KD,对蛋白的下游应用不会产生影响; 3,免疫原性低,可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体; 4,HIS-Tag与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达; ...