mCherry是从DsRed演化来的性能最好的一个单体红色荧光蛋白,可以和GFP系列荧光蛋白共用,实现多色标记体内、外实验表明,mCherry在N端和C端融合外源蛋白时,荧光蛋白活性和被融合的目标蛋白功能相互没有明显影响。这些荧光标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点: 1.不用破碎组织细胞和不加任何底物,直接通过荧光显微镜...
如MBP标签,GST标签、GFP标签、FC标签、Halo标签等,这些标签的使用可以增加目标蛋白的溶解性,缺点是对于一些应用如结晶或生产抗体等,标签必须加以去除;另一种是识别固定化配体的短肽标签,如HA标签、Myc标签、Flag标签、His标签、Strep-tag II等,这一类标签一般不会干扰目标蛋白的生物活性,对于某些应用,小标签无...
应用案例-使用HiScreen Ni FF纯化带有His标签的绿色荧光蛋白 材料与方法:本实验中,使用HiScreen Ni FF层析柱(预装有FF填料)纯化带有(His)6标签的绿色荧光蛋白GFP-(His)6,蛋白由大肠杆菌表达,粗样品共计40 mL。 实验结果:层析结果如下图所示。通过咪唑溶液线性梯度洗脱,在490 nm波长下,检测到洗脱峰,证明目的蛋白...
一般来说,GFP抗体不仅可以检测GFP或其适当的突变体,也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。 Myc抗体-抗Myc标签抗体 Myc标签是一个具有11个氨基酸的短肽(序列为EQKLISEEDL),来源于c-Myc蛋白的410-419位肽段,可放在C端或N端。Myc抗体能与...
以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化 His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中一般选用6个组氨酸(His6-tag)的标签。His6标签有许多...
(1) GST标签:是谷胱甘肽S-转移酶,具体蛋白表达产率高,表达产物易于纯化、可溶等特性,常用于pull-down。(2) HA标签:源于人类流感血凝素的99-106位氨基酸序列,HA标签具有较强的免疫原性,在蛋白分离纯化,检测示踪中应用较多,HA标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签(HA-tagged)的融合蛋白.(3) GFP:...
GFP抗体-抗GFP标签抗体 绿色萤光蛋白(Green Fluorescent Protein,简称GFP),早在1962年在水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。GFP或其突变体EGFP等被广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分布。一般来说,GFP抗体不仅可以检测GFP或其适当...
1、以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中一般选用6个组氨酸(His6-tag)的标签。His6标签有许...
以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-GFP蛋白的纯化步骤以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验...
系统标签: 蛋白 gfp 纯化步骤 缓冲液 非特异 imidazole 以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为:组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中...