总的说起来,HaloTag技术是一个观察活细胞或固定(哺乳动物)细胞的全新的技术,目前这一系列的产品有在哺乳动物细胞内表达的HaloTag融合蛋白的pHT2 Vector,pFC8A CMB Flexie Vectors ,以及各种多功能的HaloTag配基,包括荧光标记、或是亲和性操作和...
halotag技术标记原理 Halotag技术是一种用于蛋白质标记的技术,它是一种可逆的、共价的标记方法,可以实现对蛋白质的快速、高效、可控的标记。其基本原理是利用一种特殊的酶——haloalkane dehalogenase(HaloTag酶),通过基于简单的化学反应的方式,将Halotag融合蛋白质与特定化学物质之间实现共价结合。 在Halotag技术中,...
HaloTag®是活细胞和固定细胞多色细胞成像实验的首选系统。这种多功能标签可以特异地与多种配体共价结合,能够在体内体外方便地对标签蛋白加荧光基团和纯化。 HaloTag®也能提高蛋白的表达量和可溶性,因此可以用于许多下游应用。 技术 HaloTag®标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,可与多种合成的HaloTag®配...
HaloTag是由Promega公司开发的一种基于蛋白结构域的标记技术,它结合了蛋白结构域的高亲和性和化学标记物的灵活性,使其成为一种出色的蛋白质标记工具。 HaloTag标记蛋白质的原理是基于融合蛋白标签和合成荧光配基之间共价键的形成,可用于标记细胞或其他生化环境中的目的蛋白以表征和分析其定位及功能。HaloTag报告基因蛋白...
HaloTag Pull down技术简介 体外蛋白表达与Pull down技术相结合,表达出目的蛋白和标签蛋白(Halo,GST,His等)的融合蛋白,不受抗体和物种限制,仅借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,使用Pull down技术,将目标蛋白与互作的蛋白“下拉”,进而利用Western Blot或者质谱鉴定互作蛋白。蛋白Pull down实验还可以同时表达两个蛋...
简而言之,HaloTag其实是一种分子量为33KD的蛋白Tag,可以高特异性和高亲和力地与几种不同颜色的HaloTag荧光配基或者生物素快速形成稳定的共价结合。当利用基因融合技术将目标蛋白和HaloTag融合表达后,在生理条件下就可以将HaloTag荧光配基或者生物素直接定点标记在融合蛋白的HaloTag上,这种共价结合特异性高,不可逆,...
探讨HaloTag技术用于一突触核蛋白质(—synuclein,SNCA)在细胞内荧光成像及半定量分析的方法及其应用。 方法 采用重组克隆技术构建pHalo-SNCA质粒,将其转染至HEK293人胚肾细胞中,经Westernblotting鉴定Halo-SNCA融合蛋 白质的表达;通过激光共聚焦显微镜观察Halo—SNCA在细胞内的定位与分布;通过蛋白酶催化的解偶联反应的荧光...
3、利用 His-Tag PULL-DOWN 实验,验证带有 Halo-Tag 配基的结核杆菌脂肪酸合成酶(mFabH)的靶向小分子化合物与靶标蛋白的相互作用。实验结果与靶标化合物的活性吻合。 根据以上实验结果证明 Halo Tag 技术可以应用在靶向药物的筛选研究。 关键词:Halo Tag 技术;mtFabH;基因重组;蛋白表达纯化;药物筛选Research of ...
目的:探讨 HaloTag 技术用于α-突触核蛋白质(α-synuclein,SNCA)在细胞内荧光成像及半定量分析的方法及其应用。方法采用重组克隆技术构建 pHalo-SNCA 质粒,将其转染至 HEK293人胚肾细胞中,经 Western blotting 鉴定 Halo-SNCA 融合蛋白质的表达;通过激光共聚焦显微镜观察 Halo-SNCA 在细胞内的定位与分布;通...
武汉大学生物医学分析化学教育部重点实验室博士生刘安安,在其导师庞代文教授和中国科学院武汉病毒所王汉中研究员的共同指导下,利用反向遗传学技术和HaloTag标签蛋白配体多样性的特性,将衣壳蛋白VP26与HaloTag的融合蛋白特异性地表达在伪狂犬病毒的衣壳上,实现了不同荧光配体对亲代和子代伪狂犬病毒衣壳结构分别、定点的标记...