我们采用多种方法进行β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性检测,主要包括:1. 分光光度法 分光光度法是测定GUS活性最常用的方法之一。该方法利用GUS催化底物p-硝基苯-β-D-葡萄糖苷酸(pNPG)水解生成p-硝基苯酚(pNP),pNP在405 nm处具有最大吸收峰,通过测定反应体系中pNP的吸光度变化,可以计算出GUS的活性。2. 荧光法 ...
转基因植株中GUS活性检测 实验原理 •gusA(uidA)基因编码β一葡萄糖苷酸酶,它是一种催化葡糖苷酸糖苷键水解的水解酶。•在稳定转化的植株中,利用简单的组织化学检测就可精确地分析gusA(uidA)融合基因的时空表达模式。用X-gluc(5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖苷)作为底物可以进行GUS活性在植物组织和细胞中的精确...
将启动子gus载体导入植物细胞中,并利用gus基因编码的β-葡萄糖苷酶活性来筛选转基因植株。通过检测gus基因表达的酶活性,可以筛选出含有目标基因的转基因植株。启动子gus载体在植物研究中起到了检测和分析启动子活性、基因表达模式以及功能性...
GUS 活性检测(总)gus酶水解其底物xgluc产生可溶性无色的吲哚基衍生物它可扩散到其他部位必须经氧化缩合成二聚体才能形成不溶性的蓝色沉淀二聚体化由氧化催化剂如亚铁氰化钾过氧化物酶或过氧化氢酶等催化若不加fe则仅形成可溶性中间产物而扩散加亚铁氰化钾后因吲哚基二聚体化而不扩散不溶性蓝色沉淀形成越快gus酶...
植硕生物为您提供一站式启动子活性分析服务,从启动子克隆到启动子载体构建到GUS活性检测、Luc/Ren双荧光素酶检测。 一.GUS报告基因的定性、定量检测 1、GUS报告基因的定性检测 GUS能与显色底物X-gluc反应,显现蓝色,因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS染色的稳定性好,组织定位精确,成为在...
GUS活性的组织化学检测主要参照Jefferson(1987)的方法。 (1)愈伤组织瞬间表达及稳定转化的GUS检测 愈伤组织瞬间表达的GUS检测:用带有重组质粒pOsMT2bL-GUS和35S-GUS的农杆菌EHA105感染水稻愈伤,共培养3d后,从每皿中各取10颗愈伤,用蒸馏水清洗除去愈伤表面附着的农杆菌。滤纸吸干水分。同时用未作任何处理的愈伤作阴性...
GUS活性的定量检测GUS活性的定量检测 目的:定量检测转基因植株中报告基因GUS的表达水平 用途:比较某个启动子在不同组织中的表达强度,比较不同启动子在同一组织中的表达强度。 试剂: 1磷酸缓冲液母液: 0.2MNa2HPO4:71.64g/L Na2HPO4·12H2O 0.2MNaH2PO4:31.21g/L NaH2PO4·2H2O 2GUS抽提液(1L):PH=7.0 0.2MNa2...
GUS活性检测mod-中科瑞泰 系统标签: gus活性瑞泰modgluc酶反应 中科瑞泰(北京)生物科技有限公司Tel:010-5843722782598075Fax:010-82597807http://.real-timsE-mail:real-times@163应用较为广泛的报告基因是GUS基因,它来自于大肠杆菌,编码β-葡萄糖醛酸乙酰转移酶。该酶与5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸酯(5...
GUS活性的定量检测.docx,GUS活性的定量检测目的:定量检测转基因植株中报告基因GUS的表达水平用途:比较某个启动子在不同组织中的表达强度,比较不同启动子在同一组织中的表达强度。试剂: 磷酸缓冲液母液: 0.2M Na2HPO4:71.64g/L Na2HPO4·12H2O0.2M NaH2PO4:31.21g/L N
GUS活性的定量检测.docx,GUS活性的定量检测目的:定量检测转基因植株中报告基因GUS的表达水平用途:比较某个启动子在不同组织中的表达强度,比较不同启动子在同一组织中的表达强度。试剂: 磷酸缓冲液母液: 0.2M Na2HPO4:71.64g/L Na2HPO4·12H2O0.2M NaH2PO4:31.21g/L N