GST Pull-down实验用于研究蛋白之间的直接或间接相互作用，此外还可以结合色谱串联质谱（LC-MS/MS）筛选已知蛋白的未知互作蛋白。由于实验时需要将蛋白在体外纯化出来，因此这种方法属于体外研究蛋白互作的方法。实验原理 GST Pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲...
拉下实验（Pull-down）的缺点 1、两个非同一定位的蛋白可能因电荷或是强亲和力的原因造成假阳性，需用其他方法再次验证，例如Co-IP等；2、验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反映细胞内蛋白真实互作的状态；3、融合表达的GST标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。实验信息 实验过程中...
GST pull-down 是两种蛋白在试管内(细胞以外)发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可,验证蛋白之间直接的相互作用。 Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白,并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞内的体内反应结合。 GST pull-down 实验优点:可验证蛋白质-...
GST pull-down:一般用于体外实验,因为诱饵蛋白是需要加上GST标签的重组蛋白,所以是非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。 在实验难度上,重组诱饵蛋白一般采用原核表达体系,有高效的商业化载体(真核表表达体系也可以做,但需要找到合适的载体)...
6、GST pull-down对照设置 7、GST pull-down结果详细解读示例 8、GST pull-down常见问题解决 9、GST pull-down 实验优缺点 推荐内容 GST,全称为glutathione-S-transferase,即为谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(glutathione,GSH)结合,其与CoIP实验都是验证蛋白互作的有效方法。 1、GST pull-down和与CoIP的区...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设...
例如,两种并不互作的DNA结合蛋白可能会因为DNA的存在而出现相互作用的假阳性结果,因此,在进行GST pull-down实验时,加入核酸酶的步骤十分必要。 GST pull-down实验结果图怎么看 在清楚知道操作流程的前提下,弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤,结合图中展示的结果进行分析,便可以看懂实验结果图。
在这次实验中，通过GST pull down技术，可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说，实验包括两部分，首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt的孵育效果，以及在孵育后的bead中拉取β-catenin。然后是免疫印迹技术，将相同胶上的蛋白通过转膜转移到...
④GST-pull down实验； ⑤Western Blot检测目的蛋白； ⑥拍照记录实验结果。▲ GST-pull down实验流程图 GST下拉实验结果展示 GST下拉实验技术服务范畴：验证两个已知蛋白质间的相互作用 技术服务优势： ①团队经验丰富； ②交付周期短，提供原始图片，保证数据真实可靠。
结果表明,GST-NICD蛋白,而不是GST,能够下调AIB1(图C),表明AIB1可以直接与NICD结合。为了确定AIB1的哪些结构域可以与NICD结合,在293T细胞中表达了不同的AIB1结构域蛋白,并进行了GST pull down实验。结果表明,AIB1的HAT结构域负责AIB1与NICD的相互作用(图D,下图)。 为了确定AIB1是否能与MAML1相互作用,将Flag-...